Разработка и апробация набора реагентов для определения РНК классического вируса бешенства методом ОТ-ПЦР в реальном времени

Главная

Статья в Elpub

РУС ENG

Вопросы вирусологии. 2016; 61: 235-240

Разработка и апробация набора реагентов для определения РНК классического вируса бешенства методом ОТ-ПЦР в реальном времени

Дедков В. Г., Девяткин А. А., Полещук Е. М., Сафонова М. В., Маркелов М. Л., Шипулин Г. А.

https://doi.org/10.18821/0507-4088-2016-61-4-235-240

Аннотация

С целью повышения эффективности лабораторной диагностики бешенства и оптимизации надзорных мероприятий разработан набор реагентов для выявления РНК вируса бешенства методом обратнотранскриптазной полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флюоресцентной детекцией. Аналитическая чувствительность разработанного набора составила 4*10³ копий РНК в 1 мл. Высокая специфичность набора реагентов показана на репрезентативной выборке образцов, содержащих генетический материал родственных вирусов, и на образцах, содержащих мозговую ткань разных видов млекопитающих.

Список литературы

1. King M.Q., Michael A.J., Carstens B.E., Lefkowitz J.E. Virus taxonomy, classification and nomenclature of viruses. In: Ninth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Amsterdam: Elsevier, Academic Press; 2012: 95-111.

2. Dietzschold B., Faber M., Schnell M.J. New approaches to the prevention and eradication of rabies. Expert. Rev. Vaccines. 2003; 2(3): 399-406.

3. Информационный бюллетень ВОЗ № 99, сентябрь 2015 года. Available at: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs099/ru/.

4. Полещук Е.М., Сидоров Г.Н., Березина Е.С. Бешенство в Российской Федерации. Информационно-аналитический бюллетень. Омск: полиграфический центр Кан; 2013.

5. Полещук Е.М., Сидоров Г.Н., Березина Е.С. Бешенство животных в России в 2007-2011 гг. Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. 2012; (6): 8-12.

6. ГОСТ 26075-2013. Животные. Методы лабораторной диагностики бешенства. М.: Стандартинформ; 2013.

7. Хисматуллина Н.А. Методические указания по лабораторной диагностике бешенства животных. Утверждены Департаментом Ветеренарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации 14 мая 1997 г. М.; 1997.

8. Дедков В.Г., Бекова М.В., Девяткин А.А., Кулешов К.В., Полещук Е.М., Маркелов М.Л. и др. Ретроспективная диагностика двух случаев бешенства у пациентов из Астраханской области. В кн.: Материалы VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2014». М.; 2014: 453-4.

9. WHO. Expert Consultation on Rabies. Second report. WHO Technical Report Series 982. Geneva: WHO Press; 2013.

10. Delmas O., Holmes E.C., Talbi C., Larrous F., Dacheux L., Bouchier C. et al. Genomic diversity and evolution of the lyssaviruses. PLoS One. 2008; 3(4): e2057.

11. Tyagi S., Kramer F.R. Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization. Nat. Biotechnol.1996; 14(3): 303-8.

12. Van Pelt-Verkuil E., van Belkum A., Hays J.P. Principles and Technical Aspects of PCR Amplification. NY: Springer; 2008.

13. Yuryev A., ed. Methods in Molecular Biology. Vol. 402: PCR Primer Design. Totowa, New Jersey: Humana Press; 2007.

14. Kibbe W.A. OligoCalc: an online oligonucleotide properties calculator. Nucleic. Acids Res. 2007; 35(Web Server issue): W43-6.

15. Maniatis T., Fritsch E.E., Sambrook J. Molecular Cloning. A laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory; 2003.

16. Pasloske B.L., Walkerpeach C.R., Obermoeller R.D., Winkler M., Du Bois D.B. Armored RNA technology for production of ribonuclease-resistant viral RNA controls and standards. J. Clin. Microbiol. 1998; 36(12): 3590-4.

17. Cheng Y., Niu J., Zhang Y., Huang J., Li Q. Preparation of His-tagged armored RNA phage particles as a control for real-time reverse transcription-PCR detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus. J. Clin. Microbiol. 2006; 44(10): 3557-62.

18. Reed L.J., Muench H. A simple method of estimation of fifty percent endpoints. Am. J. Hyg. 1938; 27: 493-7.

19. Dupuis M., Brunt S., Appler K., Davis A., Rudd R. Comparison of Automated qRT-PCR and Direct Fluorescent Antibody Detection for Routine Rabies Diagnosis in the United States. J. Clin. Microbiol. 2015; 53(9): 2983-9.

20. Appolinário C., Allendorf S.D., Vicente A.F., Ribeiro B.D., Fonseca C.R., Antunes J.M. et al. Fluorescent antibody test, quantitative PCR pattern and clinical aspects of rabies virus strains isolatedfrom main reservoirs in Brazil. Braz. J. Infect. Dis. 2015; 19(5): 479-85.

21. Fischer M., Wernike K., Freuling C.M., Müller T., Aylan O., Brochier B. et al. A step forward in molecular diagnostics of lyssavirusesresults of a ring trial among European laboratories. PLoS One. 2013; 8(3): e58372.

Problems of Virology. 2016; 61: 235-240

Development and evaluation of the RT-PCR kit for the rabies virus diagnosis

Dedkov V. G., Deviatkin A. A., Poleschuk E. M., Safonova M. V., Markelov M. L., Shipulin G. A.

https://doi.org/10.18821/0507-4088-2016-61-4-235-240

Abstract

To improve the diagnosis, surveillance, and control for the rabies virus, a kit for hybridization-triggered fluorescence detection of rabies virus DNA by the RT-PCR technique was developed and evaluated. The analytical sensitivity of the kit was 4*10³ GE per ml. High specificity of the kit was shown using representative sampling of viral, bacterial, and human nucleic acids.

References

2. Dietzschold B., Faber M., Schnell M.J. New approaches to the prevention and eradication of rabies. Expert. Rev. Vaccines. 2003; 2(3): 399-406.

3. Informatsionnyi byulleten' VOZ № 99, sentyabr' 2015 goda. Available at: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs099/ru/.

4. Poleshchuk E.M., Sidorov G.N., Berezina E.S. Beshenstvo v Rossiiskoi Federatsii. Informatsionno-analiticheskii byulleten'. Omsk: poligraficheskii tsentr Kan; 2013.

5. Poleshchuk E.M., Sidorov G.N., Berezina E.S. Beshenstvo zhivotnykh v Rossii v 2007-2011 gg. Rossiiskii veterinarnyi zhurnal. Melkie domashnie i dikie zhivotnye. 2012; (6): 8-12.

6. GOST 26075-2013. Zhivotnye. Metody laboratornoi diagnostiki beshenstva. M.: Standartinform; 2013.

7. Khismatullina N.A. Metodicheskie ukazaniya po laboratornoi diagnostike beshenstva zhivotnykh. Utverzhdeny Departamentom Veterenarii Ministerstva sel'skogo khozyaistva i prodovol'stviya Rossiiskoi Federatsii 14 maya 1997 g. M.; 1997.

8. Dedkov V.G., Bekova M.V., Devyatkin A.A., Kuleshov K.V., Poleshchuk E.M., Markelov M.L. i dr. Retrospektivnaya diagnostika dvukh sluchaev beshenstva u patsientov iz Astrakhanskoi oblasti. V kn.: Materialy VIII Vserossiiskoi nauchno-prakticheskoi konferentsii s mezhdunarodnym uchastiem «Molekulyarnaya diagnostika - 2014». M.; 2014: 453-4.