Вопросы вирусологии. 2022; 67: 290-303
Альтернативные подходы к диагностике африканской чумы свиней на территории Российской Федерации в 2017–2021 гг.
https://doi.org/10.36233/0507-4088-112Аннотация
Введение. В рамках борьбы с африканской чумой свиней (АЧС) на территории Российской Федерации проводятся мониторинговые исследования проб от свиней и кабанов. В ходе рутинной серологической диагностики специфические антитела к вирусу выявляют лишь в единичных образцах. При этом известно об обнаружении на территории России и сопредельных стран изолятов АЧС с ослабленной вирулентностью.
Целью данной работы являлись определение возможности использования альтернативных проб и оценка эффективности используемых методов диагностики АЧС у восприимчивых животных на территории РФ.
Материалы и методы. В работе использовали биоматериал, полученный в полевых условиях и от экспериментально инфицированных животных.
Результаты. Показано, что комплексное тестирование (ПЦР-РВ и ТФ-ИФА) является более эффективным способом диагностики хронической и бессимптомной формы АЧС, чем их раздельное использование. Продемонстрирована возможность и эффективность использования альтернативных образцов в диагностике. Подтверждена высокая диагностическая чувствительность иммунопероксидазного метода, его способность выявлять антитела на более ранних, чем ТФ-ИФА, сроках и возможность использования расширенного спектра проб. Антитела к вирусу АЧС выявлены у домашних и диких свиней в пяти федеральных округах РФ. Установлено, что в пробах от инфицированных свиней, отрицательных в ПЦР-РВ, могут быть выявлены специфические антитела к вирусу АЧС при их серологическом исследовании. Наличие генома в образцах суставных тканей указывает на возможность животных с хронической и бессимптомной формой течения болезни выступать переносчиками инфекции. Обнаружение антител в пробах от отстрелянных кабанов (отрицательных или сомнительных в ПЦР-РВ) предполагает существование животных, выживших после инфицирования АЧС.
Заключение. Полученные данные требуют пересмотра стратегии надзора за АЧС, внедрения комплексных методов диагностики, направленных на параллельное обнаружение генома и антител и допускающих исследование образцов, альтернативных сыворотке, для обнаружения антител и (или) отбора и направления образцов сыворотки крови, в том числе от кабанов.
Список литературы
1. Груздев К.Н., Иголкин А.С., Рахманов А.М., Шевцов А.А. Африканская чума свиней в России: распространение и клинико-анатомическое проявление. Ветеринария сегодня. 2014; (4): 10–24.
2. Beltran-Alcrudo D., Arias M., Gallardo C., Kramer S., Penrith M.L. FAO Animal Production and Health Manual No. 19. African swine fever: Detection and diagnosis. Rome; 2017.
3. Родионова О.М., Бабаков В.А., Колодуб Г.В. О правовой природе компенсации за убой животных в очаге эпизоотии. Вестник Томского государственного университета. Право. 2020; (35): 196–215. https://doi.org/10.17223/22253513/35/17
4. Пенрит М.Л., Губерти В., Депнер К., Луборт Х. Пособие по подготовке чрезвычайных планов действий на случай эпидемии африканской чумы свиней. Пособие ФАО по здравоохранению и воспроизводству животных № 8. Ереван; 2011.
5. Alonso C., Borca M., Dixon L., Revilla Y., Rodriguez F., Escribano J.M. ICTV Report Consortium. ICTV Virus Taxonomy Profile: Asfarviridae. J. Gen. Virol. 2018; 99(5): 613–4. https://doi.org/10.1099/jgv.0.001049
6. Pérez J., Fernández A.I., Sierra M.A., Herráez P., Fernández A., Martín de las Mulas J. Serological and immunohistochemical study of African swine fever in wild boar in Spain. Vet. Rec. 1998; 143(5): 136–9. https://doi.org/10.1136/vr.143.5.136.
7. Ремыга С.Г., Першин А.С., Шевченко И.В., Иголкин А.С., Шевцов А.А. Клинические и патологоанатомические изменения у диких европейских кабанов и домашних свиней при заражении вирусом африканской чумы свиней. Ветеринария сегодня. 2016; (3): 46–51.
8. Макаров В.В., Сухарев О.И., Цветнова И.В. Эпизоотологическая характеристика вируса африканской чумы свиней. Ветеринарная практика. 2013; (1): 6–16.
9. Gallardo M.C., Reoyo A.T., Fernández-Pinero J., Iglesias I., Muñoz M.J., Arias M.L. African swine fever: a global view of the current challenge. Porcine Health Manag. 2015; 1: 21. https://doi.org/10.1186/s40813-015-0013-y
10. Gallardo C., Soler A., Nieto R., Sánchez M.A., Martins C., Pelayo V., et al. Experimental transmission of African swine fever (ASF) low virulent isolate NH/P68 by surviving pigs. Transbound. Emerg. Dis. 2015; 62(6): 612–22. https://doi.org/10.1111/tbed.12431
11. Gogin A., Gerasimov V., Malogolovkin A., Kolbasov D. African swine fever in the North Caucasus region and the Russian Federation in years 2007-2012. Virus Res. 2013; 173(1): 198–203. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2012.12.007
12. Середа А.Д., Дубровская О.А., Иматдинов А.Р., Стрижакова О.М., Васильев А.П., Синдрякова И.П. и др. Лабораторная диагностика хронической и бессимптомной форм африканской чумы свиней. Сельскохозяйственная биология. 2016; 51(4): 459–66. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2016.4.459rus
13. Eblé P.L., Hagenaars T.J., Weesendorp E., Quak S., Moonen-Leusen H.W., Loeffen W. Transmission of African Swine Fever Virus via carrier (survivor) pigs does occur. Vet. Microbiol. 2019; 237: 108345. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2019.06.018
14. Nurmoja I., Petrov A., Breidenstein C., Zani L., Forth J.H., Beer M., et al. Biological characterization of African swine fever virus genotype II strains from north-eastern Estonia in European wild boar. Transbound. Emerg. Dis. 2017; 64(6): 2034–41. https://doi.org/10.1111/tbed.12614
15. Gallardo C., Nurmoja I., Soler A., Delicado V., Simón A., Martin E., et al. Evolution in Europe of African swine fever genotype II viruses from highly to moderately virulent. Vet. Microbiol. 2018; 219: 70–9. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2018.04.001
16. Груздев К.Н., Караулов А.К., Иголкин А.С. Опыт борьбы с африканской чумой свиней в Российской Федерации и его значение для других стран. Ветеринария сегодня. 2020; (1): 38–43. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-1-32-38-43
17. Петрова О.Н., Коренной Ф.И., Караулов А.К., Шевцов А.А., Гуленкин В.М. Прогноз по африканской чуме свиней в Российской Федерации на 2020 год. Available at: https://fsvps.gov.ru/fsvpsdocs/ru/iac/asf/publications/asf_prognoz2020.pdf
18. Россельхознадзор. Эпизоотическая ситуация по АЧС в Российской Федерации в 2021 г.; 2021. Available at: https://fsvps.gov.ru/fsvps-docs/ru/iac/asf/2021/12-13/01.pdf
19. Gervasi V., Marcon A., Bellini S., Guberti V. Evaluation of the efficiency of active and passive surveillance in the detection of African Swine Fever in wild boar. Vet. Sci. 2019; 7(1): 5. https://doi.org/10.3390/vetsci7010005
20. Gallardo C., Nieto R., Soler A., Pelayo V., Fernández-Pinero J., Markowska-Daniel I., et al. Assessment of African swine fever diagnostic techniques as a response to the epidemic outbreaks in eastern European union countries: how to improve surveillance and control programs. J. Clin. Microbiol. 2015; 53(8): 2555–65. https://doi.org/10.1128/JCM.00857-15
21. OIE Terrestrial Manual 2019. Chapter 3.8.1. African swine fever (infection with African swine fever virus). Available at: https://www.oie.int/fileadmin/Home/fr/Health_standards/tahm/3.08.01_ ASF.pdf
22. Global African Swine Fever Research Alliance (GARA) Gap Analysis Report; 2018. Availanle at: https://go.usa.gov/xPfWr
23. Gallardo C., Fernández-Pinero J., Arias M. African swine fever (ASF) diagnosis, an essential tool in the epidemiological investigation. Virus Res. 2019; 271: 197676. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2019.197676
24. Mur L., Igolkin A., Varentsova A., Pershin A., Remyga S., Shevchenko I., et al. Detection of African swine fever antibodies in experimental and field samples from the Russian Federation: implications for control. Transbound. Emerg. Dis. 2016; 63(5): e436–40. https://doi.org/10.1111/tbed.12304
25. Sánchez-Vizcaíno J.M., Mur L., Gomez-Villamandos J.C., Carrasco L. An update on the epidemiology and pathology of African swine fever. J. Comp. Pathol. 2015; 152(1): 9–21. https://doi.org/10.1016/j.jcpa.2014.09.003
26. Мима К.А., Бурмакина Г.С., Васильев А.П., Казакова А.С., Дубровская О.А., Малоголовкин А.С. и др. Сравнение методов серологической диагностики африканской чумы свиней. Ветеринария. 2016; (9): 49–54.
27. Стрижакова О.М., Лыска В.М., Малоголовкин А.С., Новикова М.Б., Сидлик М.В., Ногина И.В. и др. Валидация ИФА-набора для обнаружения антител к вирусу африканской чумы свиней в крови и селезенке домашних свиней и диких кабанов. Сельскохозяйственная биология. 2016; 51(6): 845–52. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2016.6.845rus
28. Pershin A., Shevchenko I., Igolkin A., Zhukov I., Mazloum A., Aronova E., et al. A long-term study of the biological properties of ASF virus isolates originating from various regions of the Russian Federation in 2013–2018. Vet. Sci. 2019; 6(4): 99. https://doi.org/10.3390/vetsci6040099
29. Gallardo C., Soler A., Rodze I., Nieto R., Cano-Gómez C., Fernandez-Pinero J., et al. Attenuated and non-haemadsorbing (non-HAD) genotype II African swine fever virus (ASFV) isolated in Europe, Latvia 2017. Transbound. Emerg. Dis. 2019; 66(3): 1399–404. https://doi.org/10.1111/tbed.13132
30. Sun E., Zhang Z., Wang Z., He X., Zhang X., Wang L., et al. Emergence and prevalence of naturally occurring lower virulent African swine fever viruses in domestic pigs in China in 2020. Sci. China Life Sci. 2021; 64(5): 752–65. https://doi.org/10.1007/s11427-021-1904-4
31. Россельхознадзор. Эпизоотическая ситуация по АЧС в Российской Федерации, 2007-2021 гг. Available at: https://fsvps.gov.ru/fsvps-docs/ru/iac/asf/2021/12-27/03.pdf
32. Шевцов А.А., Петрова О.Н., Ремыга С.Г., Першин А.С., Груздев К.Н., Иголкин А.С. Анализ проведения лабораторных исследований по ряду вирусных болезней свиней на территории России в 2011–2017 гг. Ветеринария сегодня. 2018; (1): 42–8. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-1-24-42-48
33. European Food Safety Authority. Epidemiological analyses of African swine fever in the European Union (November 2018 to October 2019). EFSA J. 2020; 18(1): e05996. https://doi.org/10.2903/j.efsa.2020.5996
34. Zani L., Forth J.H., Forth L., Nurmoja I., Leidenberger S., Henke J., et al. Deletion at the 5’-end of Estonian ASFV strains associated with an attenuated phenotype. Sci. Rep. 2018; 8(1): 6510. https://doi.org/10.1038/s41598-018-24740-1
35. Terrestrial Animal Health Code; 2019. Available at: https://www.oie.int/en/standard-setting/terrestrial-code/access-online/
36. Журавлёва В.А., Сидлик М.В., Лыска В.М., Власов М.Е., Балышев В.М. Роль кабанов в распространении африканской чумы свиней на территории Владимирской области. Ветеринария. 2019; (5): 3–8. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2019.22.5.03-08
37. Schulz K., Staubach C., Blome S., Viltrop A., Nurmoja I., Conraths F.J., et al. Analysis of Estonian surveillance in wild boar suggests a decline in the incidence of African swine fever. Sci. Rep. 2019; 9(1): 8490. https://doi.org/10.1038/s41598-019-44890-0
38. Schulz K., Staubach C., Blome S., Nurmoja I., Viltrop A., Conraths F.J., et al. How to demonstrate freedom from African swine fever in wild boar – Estonia as an example. Vaccines (Basel). 2020; 8(2): 336. https://doi.org/10.3390/vaccines8020336
Problems of Virology. 2022; 67: 290-303
Alternative approaches to the diagnosis of African swine fever in the Russian Federation in 2017–2021
https://doi.org/10.36233/0507-4088-112Abstract
Introduction. Prevention and control of African swine fever (ASF) transmission on the territory of the Russian Federation requires monitoring based on testing of samples from pigs and wild boars. Specific anti-ASFV antibodies are rarely detected in samples during routine serological diagnostics. Although, ASF isolates with weakened virulence were confirmed in Russia and neighboring countries.
The aim of this work was to determine the possibility of using alternative samples for ASF diagnosis and evaluate the effectiveness of the diagnostic methods used on the territory of Russia.
Materials and methods. Biological materials obtained from experimentally infected animals and samples collected in the “field” conditions were used in this study.
Results. Complex testing (RT-PCR and ELISA) is a more effective approach to diagnose chronic and asymptomatic forms of ASF compared to the separate use of these techniques. The possibility and efficiency of using alternative samples in diagnostics are demonstrated. It was confirmed that IPT method overcomes ELISA by high diagnostic sensitivity and detection of antibodies on earlier stages in extended range of samples. Anti-ASFV antibodies were detected in domestic and wild pigs in five regions of Russia. Samples from infected pigs that are negative in RT-PCR can be positive for anti-ASFV antibodies. The detection of antibodies in samples from shot wild boars (negative or uncertain in RT-PCR test) suggests the existence of animals surviving ASF infection.
Conclusion. The data obtained suggest a revision of the ASF surveillance strategy, by introducing complex diagnostic methods aimed at detection of both the virus genome and anti-ASFV antibodies simultaneously.
References
1. Gruzdev K.N., Igolkin A.S., Rakhmanov A.M., Shevtsov A.A. Afrikanskaya chuma svinei v Rossii: rasprostranenie i kliniko-anatomicheskoe proyavlenie. Veterinariya segodnya. 2014; (4): 10–24.
2. Beltran-Alcrudo D., Arias M., Gallardo C., Kramer S., Penrith M.L. FAO Animal Production and Health Manual No. 19. African swine fever: Detection and diagnosis. Rome; 2017.
3. Rodionova O.M., Babakov V.A., Kolodub G.V. O pravovoi prirode kompensatsii za uboi zhivotnykh v ochage epizootii. Vestnik Tomskogo gosudarstvennogo universiteta. Pravo. 2020; (35): 196–215. https://doi.org/10.17223/22253513/35/17
4. Penrit M.L., Guberti V., Depner K., Lubort Kh. Posobie po podgotovke chrezvychainykh planov deistvii na sluchai epidemii afrikanskoi chumy svinei. Posobie FAO po zdravookhraneniyu i vosproizvodstvu zhivotnykh № 8. Erevan; 2011.
5. Alonso C., Borca M., Dixon L., Revilla Y., Rodriguez F., Escribano J.M. ICTV Report Consortium. ICTV Virus Taxonomy Profile: Asfarviridae. J. Gen. Virol. 2018; 99(5): 613–4. https://doi.org/10.1099/jgv.0.001049
6. Pérez J., Fernández A.I., Sierra M.A., Herráez P., Fernández A., Martín de las Mulas J. Serological and immunohistochemical study of African swine fever in wild boar in Spain. Vet. Rec. 1998; 143(5): 136–9. https://doi.org/10.1136/vr.143.5.136.
7. Remyga S.G., Pershin A.S., Shevchenko I.V., Igolkin A.S., Shevtsov A.A. Klinicheskie i patologoanatomicheskie izmeneniya u dikikh evropeiskikh kabanov i domashnikh svinei pri zarazhenii virusom afrikanskoi chumy svinei. Veterinariya segodnya. 2016; (3): 46–51.
8. Makarov V.V., Sukharev O.I., Tsvetnova I.V. Epizootologicheskaya kharakteristika virusa afrikanskoi chumy svinei. Veterinarnaya praktika. 2013; (1): 6–16.
9. Gallardo M.C., Reoyo A.T., Fernández-Pinero J., Iglesias I., Muñoz M.J., Arias M.L. African swine fever: a global view of the current challenge. Porcine Health Manag. 2015; 1: 21. https://doi.org/10.1186/s40813-015-0013-y
10. Gallardo C., Soler A., Nieto R., Sánchez M.A., Martins C., Pelayo V., et al. Experimental transmission of African swine fever (ASF) low virulent isolate NH/P68 by surviving pigs. Transbound. Emerg. Dis. 2015; 62(6): 612–22. https://doi.org/10.1111/tbed.12431
11. Gogin A., Gerasimov V., Malogolovkin A., Kolbasov D. African swine fever in the North Caucasus region and the Russian Federation in years 2007-2012. Virus Res. 2013; 173(1): 198–203. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2012.12.007
12. Sereda A.D., Dubrovskaya O.A., Imatdinov A.R., Strizhakova O.M., Vasil'ev A.P., Sindryakova I.P. i dr. Laboratornaya diagnostika khronicheskoi i bessimptomnoi form afrikanskoi chumy svinei. Sel'skokhozyaistvennaya biologiya. 2016; 51(4): 459–66. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2016.4.459rus
13. Eblé P.L., Hagenaars T.J., Weesendorp E., Quak S., Moonen-Leusen H.W., Loeffen W. Transmission of African Swine Fever Virus via carrier (survivor) pigs does occur. Vet. Microbiol. 2019; 237: 108345. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2019.06.018
14. Nurmoja I., Petrov A., Breidenstein C., Zani L., Forth J.H., Beer M., et al. Biological characterization of African swine fever virus genotype II strains from north-eastern Estonia in European wild boar. Transbound. Emerg. Dis. 2017; 64(6): 2034–41. https://doi.org/10.1111/tbed.12614
15. Gallardo C., Nurmoja I., Soler A., Delicado V., Simón A., Martin E., et al. Evolution in Europe of African swine fever genotype II viruses from highly to moderately virulent. Vet. Microbiol. 2018; 219: 70–9. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2018.04.001
16. Gruzdev K.N., Karaulov A.K., Igolkin A.S. Opyt bor'by s afrikanskoi chumoi svinei v Rossiiskoi Federatsii i ego znachenie dlya drugikh stran. Veterinariya segodnya. 2020; (1): 38–43. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2020-1-32-38-43
17. Petrova O.N., Korennoi F.I., Karaulov A.K., Shevtsov A.A., Gulenkin V.M. Prognoz po afrikanskoi chume svinei v Rossiiskoi Federatsii na 2020 god. Available at: https://fsvps.gov.ru/fsvpsdocs/ru/iac/asf/publications/asf_prognoz2020.pdf
18. Rossel'khoznadzor. Epizooticheskaya situatsiya po AChS v Rossiiskoi Federatsii v 2021 g.; 2021. Available at: https://fsvps.gov.ru/fsvps-docs/ru/iac/asf/2021/12-13/01.pdf
19. Gervasi V., Marcon A., Bellini S., Guberti V. Evaluation of the efficiency of active and passive surveillance in the detection of African Swine Fever in wild boar. Vet. Sci. 2019; 7(1): 5. https://doi.org/10.3390/vetsci7010005
20. Gallardo C., Nieto R., Soler A., Pelayo V., Fernández-Pinero J., Markowska-Daniel I., et al. Assessment of African swine fever diagnostic techniques as a response to the epidemic outbreaks in eastern European union countries: how to improve surveillance and control programs. J. Clin. Microbiol. 2015; 53(8): 2555–65. https://doi.org/10.1128/JCM.00857-15
21. OIE Terrestrial Manual 2019. Chapter 3.8.1. African swine fever (infection with African swine fever virus). Available at: https://www.oie.int/fileadmin/Home/fr/Health_standards/tahm/3.08.01_ ASF.pdf
22. Global African Swine Fever Research Alliance (GARA) Gap Analysis Report; 2018. Availanle at: https://go.usa.gov/xPfWr
23. Gallardo C., Fernández-Pinero J., Arias M. African swine fever (ASF) diagnosis, an essential tool in the epidemiological investigation. Virus Res. 2019; 271: 197676. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2019.197676
24. Mur L., Igolkin A., Varentsova A., Pershin A., Remyga S., Shevchenko I., et al. Detection of African swine fever antibodies in experimental and field samples from the Russian Federation: implications for control. Transbound. Emerg. Dis. 2016; 63(5): e436–40. https://doi.org/10.1111/tbed.12304
25. Sánchez-Vizcaíno J.M., Mur L., Gomez-Villamandos J.C., Carrasco L. An update on the epidemiology and pathology of African swine fever. J. Comp. Pathol. 2015; 152(1): 9–21. https://doi.org/10.1016/j.jcpa.2014.09.003
26. Mima K.A., Burmakina G.S., Vasil'ev A.P., Kazakova A.S., Dubrovskaya O.A., Malogolovkin A.S. i dr. Sravnenie metodov serologicheskoi diagnostiki afrikanskoi chumy svinei. Veterinariya. 2016; (9): 49–54.
27. Strizhakova O.M., Lyska V.M., Malogolovkin A.S., Novikova M.B., Sidlik M.V., Nogina I.V. i dr. Validatsiya IFA-nabora dlya obnaruzheniya antitel k virusu afrikanskoi chumy svinei v krovi i selezenke domashnikh svinei i dikikh kabanov. Sel'skokhozyaistvennaya biologiya. 2016; 51(6): 845–52. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2016.6.845rus
28. Pershin A., Shevchenko I., Igolkin A., Zhukov I., Mazloum A., Aronova E., et al. A long-term study of the biological properties of ASF virus isolates originating from various regions of the Russian Federation in 2013–2018. Vet. Sci. 2019; 6(4): 99. https://doi.org/10.3390/vetsci6040099
29. Gallardo C., Soler A., Rodze I., Nieto R., Cano-Gómez C., Fernandez-Pinero J., et al. Attenuated and non-haemadsorbing (non-HAD) genotype II African swine fever virus (ASFV) isolated in Europe, Latvia 2017. Transbound. Emerg. Dis. 2019; 66(3): 1399–404. https://doi.org/10.1111/tbed.13132
30. Sun E., Zhang Z., Wang Z., He X., Zhang X., Wang L., et al. Emergence and prevalence of naturally occurring lower virulent African swine fever viruses in domestic pigs in China in 2020. Sci. China Life Sci. 2021; 64(5): 752–65. https://doi.org/10.1007/s11427-021-1904-4
31. Rossel'khoznadzor. Epizooticheskaya situatsiya po AChS v Rossiiskoi Federatsii, 2007-2021 gg. Available at: https://fsvps.gov.ru/fsvps-docs/ru/iac/asf/2021/12-27/03.pdf
32. Shevtsov A.A., Petrova O.N., Remyga S.G., Pershin A.S., Gruzdev K.N., Igolkin A.S. Analiz provedeniya laboratornykh issledovanii po ryadu virusnykh boleznei svinei na territorii Rossii v 2011–2017 gg. Veterinariya segodnya. 2018; (1): 42–8. https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-1-24-42-48
33. European Food Safety Authority. Epidemiological analyses of African swine fever in the European Union (November 2018 to October 2019). EFSA J. 2020; 18(1): e05996. https://doi.org/10.2903/j.efsa.2020.5996
34. Zani L., Forth J.H., Forth L., Nurmoja I., Leidenberger S., Henke J., et al. Deletion at the 5’-end of Estonian ASFV strains associated with an attenuated phenotype. Sci. Rep. 2018; 8(1): 6510. https://doi.org/10.1038/s41598-018-24740-1
35. Terrestrial Animal Health Code; 2019. Available at: https://www.oie.int/en/standard-setting/terrestrial-code/access-online/
36. Zhuravleva V.A., Sidlik M.V., Lyska V.M., Vlasov M.E., Balyshev V.M. Rol' kabanov v rasprostranenii afrikanskoi chumy svinei na territorii Vladimirskoi oblasti. Veterinariya. 2019; (5): 3–8. https://doi.org/10.30896/0042-4846.2019.22.5.03-08
37. Schulz K., Staubach C., Blome S., Viltrop A., Nurmoja I., Conraths F.J., et al. Analysis of Estonian surveillance in wild boar suggests a decline in the incidence of African swine fever. Sci. Rep. 2019; 9(1): 8490. https://doi.org/10.1038/s41598-019-44890-0
38. Schulz K., Staubach C., Blome S., Nurmoja I., Viltrop A., Conraths F.J., et al. How to demonstrate freedom from African swine fever in wild boar – Estonia as an example. Vaccines (Basel). 2020; 8(2): 336. https://doi.org/10.3390/vaccines8020336
