Журналов:     Статей:        

Вопросы вирусологии. 2019; 64: 90-96

ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К F-БЕЛКУ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА, НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ ИНФЕКЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ ВИРУСА В КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ

Кущ А. А., Климова Р. Р., Фёдорова Н. Е., Масалова О. В., Никонова А. А., Леснова Е. И., Момотюк Е. Д., Демидова Н. А., Самарцева Т. Г., Зверев В. В.

https://doi.org/10.18821/0507-4088-2019-64-2-90-96

Аннотация

Введение. Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) является наиболее распространённой причиной острых инфекционных заболеваний респираторного тракта. Отсутствие широкого спектра терапевтических препаратов, а также вакцин для профилактики и лечения РВС-инфекции свидетельствует о высокой актуальности их разработки. Цель работы - получение высокоактивных и специфичных моноклональных антител (МкАТ), способных обнаружить РСВ в заражённых клетках и нейтрализовать инфекционную активность вируса in vitro. Материал и методы. РСВ эталонных штаммов 2 субгрупп группы А (A2 и Long) размножали в перевиваемых клетках HEp-2 и МА-104 соответственно. Мышей иммунизировали очищенным вирусом, МкАТ получали с помощью гибридомной технологии. Результаты. Получена панель из 6 МкАТ, взаимодействующих с РСВ (А2 и Long) и с F-белком РСВ: 4 МкАТ принадлежали к иммуноглобулинам класса G, изотипам IgG2a или IgG2b; 2 МкАТ - к классу IgM. Тип лёгкой цепи во всех моноклональных Ig был kappa. Полученные МкАТ активно взаимодействовали с РСВ в иммуноферментном анализе, в реакциях иммунофлюоресценции и иммунопероксидазной окраски заражённых клеток, а также в иммунодоте. 5 из 6 МкАТ нейтрализовали инфекционную активность вируса в клеточной культуре. Обнаружены значительные различия в способности МкАТ реагировать с F-белком в иммунохимических и биологических реакциях, что предполагает направленность МкАТ к разным антигенным сайтам. Обсуждение. Сравнительный анализ с опубликованными данными свидетельствует о том, что полученные МкАТ можно использовать для разработки диагностических препаратов и тест-систем, для обнаружения РСВ в клинических материалах и для доказательства этиологии инфекции при выделении вируса, в том числе быстрым культуральным методом. Заключение. Высокая активность и специфичность показывают, что разработанные МкАТ могут служить основой для создания новых профилактических препаратов и вакцин.

Problems of Virology. 2019; 64: 90-96

DEVELOPMENT AND PROPERTIES OF NEUTRALIZING MONOCLONAL ANTIBODIES FOR FUSION PROTEIN OF RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS

Kushch A. A., Klimova R. R., Fedorova N. E., Masalova O. V., Niconova A. A., Lesnova E. I., Momotyuk E. D., Demidova N. A., Samartseva T. G., Zverev V. V.

https://doi.org/10.18821/0507-4088-2019-64-2-90-96

Abstract

Introduction. Respiratory syncytial virus (RSV) is the most common cause of lower respiratory tract infections in infants and the elderly. The absence of a wide range of therapeutic drugs and vaccines indicates to the high relevance of the development of new effective drugs for the prevention and treatment of RSV infections. Purpose: to obtain highly active and specific monoclonal antibodies (MAbs) capable of detecting RSV in infected cells and neutralizing the infectious activity of the virus in vitro. Material and methods. RSV reference strains of group A 2 subgroups (A2 and Long) were propagated in HEp-2 and MA-104 cell lines, respectively. Mice were immunized with purified RSV A2 virus. MAbs were obtained using hybridoma technology. Results. A panel of 6 MAbs reacting with RSV strains А2 and Long has been obtained. Four MAbs were IgG (IgG2a or IgG2b subtype), two MAbs were IgM. All MAbs reacted with RSV F-protein in immunochemical tests. The MAbs actively reacted with RSV in ELISA, in immufluorescence and peroxidase staining of infected cells, and in immunodot test. Five out of 6 MAbs neutralized of RSV in cell culture. Different properties of MAbs suggest that they target different antigenic sites of F-protein. Discussion. Comparative analysis suggests that the obtained MAbs can be used for the development of diagnostic preparations, for RSV detection in clinical materials and confirmation of infection etiology by rapid culture method. Conclusion. High activity and specificity of MAbs indicate that they can serve as a basis for development vaccines and preventive medicines.