Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019; : 3-8
Разработка схемы получения антител к рибонуклео протеину аттенуированного вируса бешенства
https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-5-3-8Аннотация
Цель. Выделение рибонуклеопротеина (РНП) аттенуированного вируса бешенства с последующей разработкой схем иммунизации животных препаратами на его основе и установлением наиболее эффективной схемы, позволяющей получить сыворотку с высоким титром антител к РНП.
Материалы и методы. В работе использовали перевиваемую клеточную линию Vero, штамм вируса бешенства «Москва 3253Vero», адаптированный к репродукции на клетках Vero, кроликов породы шиншилла. С целью получения сывороток, содержащих антитела к РНП вируса бешенства, предложены экспериментальные схемы иммунизации животных РНП, в том числе и с адъювантами: полиоксидонием и коллоидным золотом. Динамика накопления антител к РНП вируса бешенства в сыворотке крови подопытных животных исследована методом дот-иммуноанализа.
Результаты. Целевой компонент (РНП вируса бешенства) выделяли непосредственно из цитоплазмы инфицированной вирусом бешенства клеточной культуры Vero по модифицированному методу M. Dastkhosh (2014), лиофильно высушивали и использовали при разработке препаратов для иммунизации животных-продуцентов. При исследовании динамики образования антител к РНП вируса бешенства методом дот-иммуноанализа установлена эффективность действия адъюванта — наночастиц коллоидного золота размером от 15 до 17 нм, применение которого позволяет увеличить титр антител в 2 раза.
Заключение. Полученные результаты представляют интерес для дальнейших исследований, связанных с конструированием диагностических препаратов и разработкой методических приемов с использованием подобных препаратов.
Список литературы
1. Абрамова Е.Г., Генералов С.В., Матвеева Ж.В. и др. Экспериментальное обоснование внедрения культуральных технологий в производство антирабического иммуноглобулина. Проблемы особо опасных инфекций. 2016, 2: 95-101.
2. Авдеева Ж.И., Алпатова Н.А., Акользина С.Е. и др. Иммуноадъювантный эффект цитокинов. Тихоокеанский мед. журнал. 2009, 3: 19-22.
3. Гаврилова Ю.К., Генералов С.В., Абрамова Е.Г. и др. Экспресс-анализ активности антирабических сывороток и иммуноглобулина в клеточных культурах методом иммунофлуоресценции. Биотехнология. 2018, 4 (34): 83-88.
4. Генералов С.В., Абрамова Е.Г., Матвеева Ж.В. и др. Получение кроличьего антирабического иммуноглобулина с применением культурального антигена. Проблемы особо опасных инфекций. 2012, 2 (112): 78-81.
5. Германчук В.Г., Семакова А.П., Шавина Н.Ю. Этические принципы при обращении с лабораторными животными в эксперименте с патогенными биологическими агентами I-II групп. Проблемы особо опасных инфекций. 2018, 4: 33-38.
6. Сухарьков А.Ю., Назаров Н.А., Метлин А.Е. Диагностика бешенства животных методом иммуноферментного анализа, сравнение прямого и непрямого сэндвич-варианта. Ветеринария Кубани. 2011, 6: 12-14.
7. Хисматуллина Н.А., Гулюкин А.М., Шуралев Э.А. и др. Ускоренный метод диагностики бешенства в культуре клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК-1). Гены и клетки. 2014, 3 (9): 276-280.
8. Шарапова Н.А., Абрамова Е.Г., Никифоров А.К. и др. Определение активности антирабических сывороток и препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина in vitro в дот-иммуноанализе. Проблемы особо опасных инфекций. 2010, 103(1): 63-66.
9. Asgary V., Shoari A., Baghbani-Arani F. et al. Green synthesis and evaluation of silver nanoparticles as adjuvant in rabies veterinary vaccine. Int. J. Nanomedicine. 2016, 11: 3597-3605.
10. Bedekovic T., Lemo N., Lojkic I. et al. Modification of the fluorescent antibody virus neutralization test — Elimination of the cytotoxic effect for the detection of rabies virus neutralising antibodies. Journal of Virological Methods. 2013, 189: 204-208.
11. Caporale G.M.M., Silva A. de C.R., Peixoto Z.M.P. et al. First production of fluorescent antiribonucleoproteins conjugate for diagnostic of rabies in Brazil. Journal of clinical laboratory analysis. 2009, 23: 7-13.
12. Dastkhosh M., Rahimi P., Haghighat S. et al. Cell culture extraction and purification of rabies virus nucleoprotein. Jundishapur journal of microbiology. 2014, 7(9): 1-4.
13. Dykman L.A., Khlebtsov N.G. Immunological properties of gold nanoparticles. Chem. Sci. 2017, (8): 1719-1735.
14. Frens G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in minodisperse gold suspension. Nat. Phys. Sci. 1973, 241(105): 20-21.
15. WHO Expert Consultation on Rabies: third report. WHO technical report series 1012. Geneva, Switzerland. 2018.
Journal of microbiology, epidemiology and immunobiology. 2019; : 3-8
Development of the scheme of obtaining antibodies to the ribonucleoprotein of attenuated rabies virus
https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-5-3-8Abstract
Aim. Isolation of ribonucleoprotein (RNP) of an attenuated rabies virus, develop schemes for immunizing animals with RNP-based preparations and determine the most effective scheme that allows obtaining serum with a high antibody titer to the RNP.
Materials and methods. We used the transplantable cell line Vero, the strain rabies virus «Moscow 3253 Vero», adapted for reproduction on Vero, rabbits of the chinchilla breed. In order to obtain serums containing antibodies to the RNP of the rabies virus, experimental schemes have been proposed for immunizing animals with RNP, including with adjuvants: polyoxidonium and colloidal gold. The dynamics of the accumulation of antibodies to the RNP of the rabies virus in the blood serum of experimental animals was studied by dot-immunoassay.
Results. The target component (RNP of the rabies virus) was isolated directly from the cytoplasm of the Vero cell culture infected with the rabies virus according to the modified M. Dastkhosh (2014) method, lyophilized and used in the development of preparations for immunizing experimental animals. In the study of the dynamics of the formation of antibodies to RNP of the rabies virus by the method of dot-immunoassay, the effectiveness of an adjuvant is established — colloidal gold nanoparticles ranging in size from 15 to 17 nm, the use of which makes it possible to increase the antibody titer by 2 times.
Conclusion. The results obtained are of interest for further research related to the design of diagnostic products and the development of methodological techniques using such preparations.
References
1. Abramova E.G., Generalov S.V., Matveeva Zh.V. i dr. Eksperimental'noe obosnovanie vnedreniya kul'tural'nykh tekhnologii v proizvodstvo antirabicheskogo immunoglobulina. Problemy osobo opasnykh infektsii. 2016, 2: 95-101.
2. Avdeeva Zh.I., Alpatova N.A., Akol'zina S.E. i dr. Immunoad\"yuvantnyi effekt tsitokinov. Tikhookeanskii med. zhurnal. 2009, 3: 19-22.
3. Gavrilova Yu.K., Generalov S.V., Abramova E.G. i dr. Ekspress-analiz aktivnosti antirabicheskikh syvorotok i immunoglobulina v kletochnykh kul'turakh metodom immunofluorestsentsii. Biotekhnologiya. 2018, 4 (34): 83-88.
4. Generalov S.V., Abramova E.G., Matveeva Zh.V. i dr. Poluchenie krolich'ego antirabicheskogo immunoglobulina s primeneniem kul'tural'nogo antigena. Problemy osobo opasnykh infektsii. 2012, 2 (112): 78-81.
5. Germanchuk V.G., Semakova A.P., Shavina N.Yu. Eticheskie printsipy pri obrashchenii s laboratornymi zhivotnymi v eksperimente s patogennymi biologicheskimi agentami I-II grupp. Problemy osobo opasnykh infektsii. 2018, 4: 33-38.
6. Sukhar'kov A.Yu., Nazarov N.A., Metlin A.E. Diagnostika beshenstva zhivotnykh metodom immunofermentnogo analiza, sravnenie pryamogo i nepryamogo sendvich-varianta. Veterinariya Kubani. 2011, 6: 12-14.
7. Khismatullina N.A., Gulyukin A.M., Shuralev E.A. i dr. Uskorennyi metod diagnostiki beshenstva v kul'ture kletok nevrinomy Gasserova uzla krysy (NGUK-1). Geny i kletki. 2014, 3 (9): 276-280.
8. Sharapova N.A., Abramova E.G., Nikiforov A.K. i dr. Opredelenie aktivnosti antirabicheskikh syvorotok i preparata geterologichnogo antirabicheskogo immunoglobulina in vitro v dot-immunoanalize. Problemy osobo opasnykh infektsii. 2010, 103(1): 63-66.
9. Asgary V., Shoari A., Baghbani-Arani F. et al. Green synthesis and evaluation of silver nanoparticles as adjuvant in rabies veterinary vaccine. Int. J. Nanomedicine. 2016, 11: 3597-3605.
10. Bedekovic T., Lemo N., Lojkic I. et al. Modification of the fluorescent antibody virus neutralization test — Elimination of the cytotoxic effect for the detection of rabies virus neutralising antibodies. Journal of Virological Methods. 2013, 189: 204-208.
11. Caporale G.M.M., Silva A. de C.R., Peixoto Z.M.P. et al. First production of fluorescent antiribonucleoproteins conjugate for diagnostic of rabies in Brazil. Journal of clinical laboratory analysis. 2009, 23: 7-13.
12. Dastkhosh M., Rahimi P., Haghighat S. et al. Cell culture extraction and purification of rabies virus nucleoprotein. Jundishapur journal of microbiology. 2014, 7(9): 1-4.
13. Dykman L.A., Khlebtsov N.G. Immunological properties of gold nanoparticles. Chem. Sci. 2017, (8): 1719-1735.
14. Frens G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in minodisperse gold suspension. Nat. Phys. Sci. 1973, 241(105): 20-21.
15. WHO Expert Consultation on Rabies: third report. WHO technical report series 1012. Geneva, Switzerland. 2018.
