Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019; 1: 95-100
РАЗРАБОТКА ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ МЕТОДОВ ОЦЕНКИ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА РЕКОМБИНАНТНОЙ ВАКЦИНЫ СИНЕГНОЙНОЙ
https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-1-95-100Аннотация
Цель. Разработка и оптимизация иммуноферментных методов для контроля качества рекомбинантной вакцины синегнойной. Материалы и методы. Рекомбинантные белки в промежуточных продуктах и при контроле полноты сорбции выявляли в «сэндвич» вариантах твердофазного ИФА с использованием специфических поликлональных и моноклональных антител. Определение антигена в вакцине проводили по остаточному количеству антител, специфичных к анатоксину или OprF, не связавшихся с вакцинным препаратом в процессе предварительной инкубации. Результаты. Разработаны и оптимизированы ИФА для количественного определения компонентов (анатоксина и мембранного белка OprF) рекомбинантной вакцины синегнойной в процессе производства. Установлено, что методики являются специфичными для определения анатоксина и OprF, предел их количественного определения обладает приемлемой надежностью, показана возможность выбора интерполяции калибровочной зависимости в пределах аналитической области, правильность и прецизиозность удовлетворяют критериям приемлемости, методика устойчива в условиях проведения анализа. Заключение. Методы могут быть использованы для контроля качества препарата в процессе его изготовления и хранения.
Список литературы
1. Калошин А.А., Гатыпова Е.В., Михайлова Н.А. Получение рекомбинантных форм белка F наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa и исследование их иммуногенных свойств. Биотехнология. 2011, 2:74-84.
2. Калошин А.А., Исаков М.А., Михайлова Н.А., Вертиев Ю.В. Получение рекомбинантной атоксической формы экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2012, 154 (9): 330-335.
3. Калошин А.А., Леонова Е.И., Солдатенкова А.В., Михайлова Н.А. Исследование протективных свойств рекомбинантного комплекса белка F наружной мембраны и анатоксина Pseudomonas aeruginosa. Вестник РАМН. 2016, 71 (1): 5-10.
4. ОФС.1.1.0012.15. Валидация аналитических методик.
5. ОФС.1.1.0013.15. Статистическая обработка результатов эксперимента.
6. Cолдатенкова А.В., Калошин А.А., Поддубиков А.В., Зимина Е.М., Калиниченко Е.О, Михайлова Н.А. Протективные свойства и безопасность рекомбинантной синегнойной вакцины. Цитокины и воспаление. 2017, 16 (4): 73 -75.
7. Cuervo M.L. , Sterling A.L. , Nicot I.A. et al. Validation of a new alternative for determining in vitro potency in vaccines containing Hepatitis B from two different manufacturers. Biologicals. 2008, 36: 375-382.
8. Guideline on validation of bioanalytical methods (draft). European Medicines Agency. Committee for Medicinal Products of Human Use (CHMP). 2011.
9. Nakane P.K., Kawoi A.A. New method of conjugation. Histochem. Cytochem. 1974, 22:1084-1091.
10. Shanmugham R., Thirumeni N., Rao V.S. et al. Immunocapture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Assessment of In Vitro Potency of Recombinant Hepatitis B Vaccine. Clinical and Vaccine Immunology. 2010, 17 (8): 1252-1260.
Journal of microbiology, epidemiology and immunobiology. 2019; 1: 95-100
DEVELOPMENT OF ELISAS FOR THE QUALITY CONTROL OF A RECOMBINANT PSEUDOMONAS VACCINE
https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-1-95-100Abstract
Aim. Development and optimization of enzyme immunoassays for quality control of pseudomonas recombinant vaccine. Materials and methods. Recombinant proteins in intermediate products and for completeness of adsorption control were detected in sandwich immunoassay using specific polyclonal and monoclonal antibodies. Detection of the antigen in the vaccine was carried out on the residual amount of antibodies specific to toxoid or OprF that did not bind to the vaccine preparation during the preincubation. Results. ELISAs have been developed and optimized for the quantitative determination of the components (toxoid and membrane protein OprF) of the Pseudomonas recombinant vaccine during the production process. It has been established that: the methods are specific for the determination of toxoid and OprF, the quantitative limit determination has acceptable reliability, the possibility of choosing interpolation of the calibration dependence within the analytical area is shown, the accuracy and precision meets the acceptance criteria, the technique is stable under the conditions of the analysis. Conclusion. Methods can be used to control the quality of the drug during its developing and storage.
References
1. Kaloshin A.A., Gatypova E.V., Mikhailova N.A. Poluchenie rekombinantnykh form belka F naruzhnoi membrany Pseudomonas aeruginosa i issledovanie ikh immunogennykh svoistv. Biotekhnologiya. 2011, 2:74-84.
2. Kaloshin A.A., Isakov M.A., Mikhailova N.A., Vertiev Yu.V. Poluchenie rekombinantnoi atoksicheskoi formy ekzotoksina A Pseudomonas aeruginosa. Byulleten' eksperimental'noi biologii i meditsiny. 2012, 154 (9): 330-335.
3. Kaloshin A.A., Leonova E.I., Soldatenkova A.V., Mikhailova N.A. Issledovanie protektivnykh svoistv rekombinantnogo kompleksa belka F naruzhnoi membrany i anatoksina Pseudomonas aeruginosa. Vestnik RAMN. 2016, 71 (1): 5-10.
4. OFS.1.1.0012.15. Validatsiya analiticheskikh metodik.
5. OFS.1.1.0013.15. Statisticheskaya obrabotka rezul'tatov eksperimenta.
6. Coldatenkova A.V., Kaloshin A.A., Poddubikov A.V., Zimina E.M., Kalinichenko E.O, Mikhailova N.A. Protektivnye svoistva i bezopasnost' rekombinantnoi sinegnoinoi vaktsiny. Tsitokiny i vospalenie. 2017, 16 (4): 73 -75.
7. Cuervo M.L. , Sterling A.L. , Nicot I.A. et al. Validation of a new alternative for determining in vitro potency in vaccines containing Hepatitis B from two different manufacturers. Biologicals. 2008, 36: 375-382.
8. Guideline on validation of bioanalytical methods (draft). European Medicines Agency. Committee for Medicinal Products of Human Use (CHMP). 2011.
9. Nakane P.K., Kawoi A.A. New method of conjugation. Histochem. Cytochem. 1974, 22:1084-1091.
10. Shanmugham R., Thirumeni N., Rao V.S. et al. Immunocapture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Assessment of In Vitro Potency of Recombinant Hepatitis B Vaccine. Clinical and Vaccine Immunology. 2010, 17 (8): 1252-1260.
