МЕХАНИЗМЫ АТТЕНУАЦИИ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННОГО ШТАММА А/КРАСНОДАР/101/35/59 (H2N2)

Главная

Статья в Elpub

РУС ENG

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2016; : 49-56

МЕХАНИЗМЫ АТТЕНУАЦИИ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННОГО ШТАММА А/КРАСНОДАР/101/35/59 (H2N2)

Маркушин С. Г., Свитич О. А., Кинкулькина А. Р., Коптяева И. Б., Лисовская К. В.

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2016-2-49-56

Аннотация

Цель. Изучение механизмов аттенуации холодоадаптированного (ХА) штамма А/ Краснодар/101/35/59 (ffiN2) вируса гриппа, связанных с нарушением функций белка NS1. Материалы и методы. Проведено изучение интерфероногенной активности ХА штамма А/Краснодар/101/35/59 (ffiN2), его родительского варианта А/Краснодар/101/59 (ffiN2), вирулентного штамма А/WSN/33 (H1N1) и ряда одногенных и полигенных реассортантов между данными штаммами, полученных с помощью обратной генетики. Изучение динамики экспрессии гена ИФНр проводили с использованием методического подхода ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Результаты. Было показано, что включение в состав генома вирулентного штамма А/WSN/33 (H1N1) РВ1-гена ХА штамма А/ Краснодар/101/35/59 (ffiN2) с реверсией к дикому типу не приводит к резкому изменению интерфероногенной активности реассортанта. В то же время, аналогичное включение РВ1-гена ХА штамма приводила к запредельному росту интерфероногенной активности реассортанта. С другой стороны, включение в состав генома вирулентного штамма А/ WSN/33 NP-гена дикого штамма А/Краснодар/101/59 (ffiN2) не отличалось по эффекту на интерфероногенность реассортанта от включения NP-гена ХА штамма. Заключение. На формирование аттенуационного фенотипа реассортантов могут влиять как констелляция генов родительских вариантов, так и мутации, локализованных в этих генах. Полученные результаты позволяют предположить возможные механизмы аттенуации ХА штамма, связанных с нарушением функции NS гена.

Список литературы

1. Гендон Ю.З., Маркушин С.Г., Цфасман Т.М. и др. Новые холодоадаптированные штаммы-доноры аттенуации для живых вакцин против гриппа. Вопросы вирусологии. 2013, 1: 11-17.

2. Гендон Ю.З., Маркушин С.Г., Акопова И.И. и др. Аттенуированный холодоадаптированный штамм вируса гриппа А/Краснодар/ 101/35/59 (Н2№) для получения штаммов живой интраназальной гриппозной вакцины. Патент РФ на изобретение № 2354695.

3. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М., Практика, 1999.

4. Свитич О.А., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. и др. Аналитический подход в изучении противовирусного и иммуномодулирующего действия препаратов на модели герпесвирусной инфекции in vitro. Российский иммунологический журнал. 2013, 4: 377384.

5. Терехов А.В., Цфасман Т.М., Маркушин С.Г. и др. Генетические основы аттенуации холодоадаптированного штамма А(Н2№)/Краснодар/101/35/59-донора для живых гриппозных вакцин. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2013а, 3 (70): 70-77.

6. Терехов А.В., Цфасман Т.М., Маркушин С.Г. и др. Изучение att- фенотипа реассортантов между вирулентным штаммом вируса гриппа А(Н1N1)/WSN/33 и вакцинным холодоадаптированным штаммом вируса гриппа А(Н2№)/Краснодар/101/35/59. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2013b, 5 (72): 41-47.

7. Gack M.U., Albrecht R.A., Urano T. et al. Influenza A virus NS1 targets the ubiquitin ligase TRIM25 to evade recognition by the host viral RNA sensor RIG-1. Cell Host Microbe.2009, 5: 439-449.

8. Hoffmann E., Krauss S., Perez D. et al. Eight-plasmid system for rapid generation of influenza virus vaccines. Vaccine. 2002, 20: 3165-3170.

9. Mibayashi M., Martinez-Sobrido L., Loo Y.M. et al. Inhibition of retinoic acid-inducible gene I-mediated induction ofbeta interferon by the NS1 protein of influenza A virus. J.Virol. 2007, 81: 514-524.

10. Noah D.L., Twu K.Y., Krug R.M. Cellular antiviral responses against influenza A virus are countered at the posttranscriptional level by the viral NS1A protein via its binding to a cellular protein required for the 3’ end processing of cellular pre-mRNAS. Virology. 2003, 307: 386395.

11. Pichlmair A., Schulz O., Tan C.P. et al. Rig-1-mediated antiviral responses to single-stranded RNA bearing 5’ - phosphates. Science. 2006, 314: 997-1001.

12. Rei-Lin Kuo, Krug R. M. Influenza A virus polymerase is an integral component of the CPSF30-NS1A protein complex in infected cells. J. Virol. 2009, 83: 1611-1616.

13. Tsfasman T.M., Markushin S.G., Akopova I.I. et al. Molecular mechanisms of reversion to the ts+ phenotype of influenza a cold-adapted (ca)virus strain. J. Gen. Virol. 2007,88: 27242729.

14. Wang W, Krug R.M. The RNA-binding and effector domains of the viral NS1 protein are conserved to different extents among influenza A and B viruses. Virology.1996, 223: 41-50.

Journal of microbiology, epidemiology and immunobiology. 2016; : 49-56

MECHANISMS OF ATTENUATION OF COLD-ADAPTED STRAIN A/KRASNODAR/101/35/59 (H2N2)

Markushin S. G., Svitich O. A., Kinkulkina A. R., Koptyaeva I. B., Lisovskaya K. V.

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2016-2-49-56

Abstract

Aim. Study of mechanisms of attenuation of cold-adapted (ca) influenza virus strain A/ Krasnodar/101/35/59 (H2N2), associated with disruption of NS1 protein functions. Materials and methods. Study of interferonogenic activity of ca strain A/Krasnodar/101/35/59 (H2N2), its parent variant A/Krasnodar/101/59 (H2N2), virulent strain A/WSN/33 (H1N1) and a number of single gene and multiple gene reassortants between these strains, obtained using reverse genetics, was carried out. Study of dynamics of IFNp gene expression was carried out by using a methodical approach of RT-PCR in real time mode. Results. Inclusion of PB-1 gene of ca strain A/ Krasnodar/101/35/59 (H2N2) with reversion to wild type into genome composition of virulent strain А/WSN/33 (H1N1) does not result in a sharp change of interferonogenic activity of the reassortant. At the same time, similar inclusion of PB-1 gene of ca strain resulted in an incredible growth of interferonogenic activity of the reassortant. On the other hand, inclusion of NP-gene of wild type strain A/Krasnodar/101/59 (H2N2) into genome composition of the wild type strain А/WSN/33 did not differ by effect on interferonogenicity of the reassortant from inclusion of NP-gene of ca strain. Conclusion. Both constellations of genes of parent variants and mutations localized in these genes could affect formation of attenuation phenotype of reassortants. The data obtained allow to assume possible mechanisms of attenuation of ca strains, associated with disruption of NS gene function.

References

1. Gendon Yu.Z., Markushin S.G., Tsfasman T.M. i dr. Novye kholodoadaptirovannye shtammy-donory attenuatsii dlya zhivykh vaktsin protiv grippa. Voprosy virusologii. 2013, 1: 11-17.

2. Gendon Yu.Z., Markushin S.G., Akopova I.I. i dr. Attenuirovannyi kholodoadaptirovannyi shtamm virusa grippa A/Krasnodar/ 101/35/59 (N2№) dlya polucheniya shtammov zhivoi intranazal'noi grippoznoi vaktsiny. Patent RF na izobretenie № 2354695.

3. Glants S. Mediko-biologicheskaya statistika. M., Praktika, 1999.

4. Svitich O.A., Koval'chuk L.V., Gankovskaya L.V. i dr. Analiticheskii podkhod v izuchenii protivovirusnogo i immunomoduliruyushchego deistviya preparatov na modeli gerpesvirusnoi infektsii in vitro. Rossiiskii immunologicheskii zhurnal. 2013, 4: 377384.

5. Terekhov A.V., Tsfasman T.M., Markushin S.G. i dr. Geneticheskie osnovy attenuatsii kholodoadaptirovannogo shtamma A(N2№)/Krasnodar/101/35/59-donora dlya zhivykh grippoznykh vaktsin. Epidemiologiya i vaktsinoprofilaktika. 2013a, 3 (70): 70-77.

6. Terekhov A.V., Tsfasman T.M., Markushin S.G. i dr. Izuchenie att- fenotipa reassortantov mezhdu virulentnym shtammom virusa grippa A(N1N1)/WSN/33 i vaktsinnym kholodoadaptirovannym shtammom virusa grippa A(N2№)/Krasnodar/101/35/59. Epidemiologiya i vaktsinoprofilaktika. 2013b, 5 (72): 41-47.

7. Gack M.U., Albrecht R.A., Urano T. et al. Influenza A virus NS1 targets the ubiquitin ligase TRIM25 to evade recognition by the host viral RNA sensor RIG-1. Cell Host Microbe.2009, 5: 439-449.

8. Hoffmann E., Krauss S., Perez D. et al. Eight-plasmid system for rapid generation of influenza virus vaccines. Vaccine. 2002, 20: 3165-3170.

11. Pichlmair A., Schulz O., Tan C.P. et al. Rig-1-mediated antiviral responses to single-stranded RNA bearing 5’ - phosphates. Science. 2006, 314: 997-1001.

12. Rei-Lin Kuo, Krug R. M. Influenza A virus polymerase is an integral component of the CPSF30-NS1A protein complex in infected cells. J. Virol. 2009, 83: 1611-1616.

13. Tsfasman T.M., Markushin S.G., Akopova I.I. et al. Molecular mechanisms of reversion to the ts+ phenotype of influenza a cold-adapted (ca)virus strain. J. Gen. Virol. 2007,88: 27242729.

14. Wang W, Krug R.M. The RNA-binding and effector domains of the viral NS1 protein are conserved to different extents among influenza A and B viruses. Virology.1996, 223: 41-50.

МЕХАНИЗМЫ АТТЕНУАЦИИ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННОГО ШТАММА А/КРАСНОДАР/101/35/59 (H2N2)

Аннотация

MECHANISMS OF ATTENUATION OF COLD-ADAPTED STRAIN A/KRASNODAR/101/35/59 (H2N2)

Abstract

События

EasyCookieInfo