ПРОТОЧНО-ЦИТОФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ШТАММОВ YERSINIA PESTIS

Главная

Статья в Elpub

РУС ENG

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2017; : 3-9

ПРОТОЧНО-ЦИТОФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ШТАММОВ YERSINIA PESTIS

Сазанова Е. В., Шмелькова Т. П., Кравцов А. Л., Малюкова Т. А., Попов Ю. А.

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-6-3-9

Аннотация

Цель. Изучение дитотоксического воздействия штаммов Yersinia pestis с различной степенью вирулентности на лейкоциты цельной дефибринированной крови человека. Материалы и методы. В работе использовано 15 штаммов Y. pestis. ДНК-гистограммы регистрировали с помощью проточного цитофлуориметра. Результаты. Экспериментально обоснована возможность использования показателя цитотоксичности для дифференциации штаммов Y. pestis на вирулентные и авирулентные. Полученные данные сопоставимы с показателем LD₅o для мышей и не противоречат молекулярно-генетическим характеристикам штаммов. Заключение. Предлагаемый подход позволяет получать достоверные результаты и является перспективным для оценки вирулентности штаммов Y. pestis.

Список литературы

1. Козинец Г.И., Высоцкий В.В., Погорелов В.М., Еровиченков А.А., Малов В.А. Кровь и инфекция. М., Триада-Фарм, 2001.

2. Кравцов А.Л., Пилипенко Т.Ю., Коровкин С.А., Наумов А.В. Способ оценки фагоцитоза. А.с. 1522923 СССР, МКИ G 01 № 33/53. № 4014143. Изобретения. 1994, 4: 187.

3. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. Г.Г.Онишенко, В.В. Кутырев (ред.). М., Шико, 2013.

4. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики чумы для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней. Методические указания. МУК 4.2.2940-11.

5. Пустовалов В.Л., Васильева Г.И., Киселева A.K. Устойчивость к фагоцитозу штаммов чумного микроба в зависимости от температуры культивирования. Вопросы профилактики природноочаговых инфекций. Саратов, 1983, с. 16-21.

6. Хайдуков С.В., Зурочка А.В. Вопросы современной проточной цитометрии. Клиническое применение. Изд-во Челябинская государственная медицинская академия, Челябинск. 2008. /

7. ШмельковаТ.П., Кравцов А.Л, ЩуковскаяТ.Н., ЛяпинМ.Н., Костюкова Т.А., Малюкова Т.А., Головко Е.М., Видяева Н.А., Коннов Н.П. Влияние биологических свойств чумного микроба на развитие апоптоза лейкоцитов крови человека в системе in vitro. Проблемы особо опасных инфекций. 2007, 1: 85-89.

8. Шмелькова Т.П., Сазанова Е.В., Кравцов А.Л., Малюкова Т.А., Попов Ю.А., Бойко А.В. Девдариани З.Л., Щуковская Т.Н. Определение вирулентных свойств патогенных микроорганизмов in vitro: состояние вопроса. Жури, микробиол. 2016, 6: 100-110.

9. Bashaw J., Norris S., Weeks S. et al. Development of in vitro correlate assay of immunity to infection with Yersinia pestis. Clin, And. Vaccine Immunology. 2007, 14 (5): 605-616.

10. Bubeck S.S., Cantwell A.M., Dube P.H. Delayed inflammatory response to primary pneumonic plague occurs in both outbred and inbred mice. Infection and Immunity. 2007, 75 (2): 697-705.

11. Kravtsov A.L., Grebenyukova T.P., Bobyleva E.V. et al. Flow cytofluorometric assay of whole blood leukocyte DNA degradation in response to Yersinia pestis and Staphylococcus aureus. Proceedings ofSPIE. 2001, 4241: 260-267.

12. Parrino J., Hotchkiss R.S., BrayM. Preventation of immunecell apoptosis as potential therapeutic strategy for severe infections. Emerg. Infect. Dis. 2007, 13 (2): 191-198.

13. Silva T.M. et al. Secondary necrosis in multicellular animals: an outcome of apoptosis with pathogenic implications. Apoptosis. 2008, 13: 463-482.

14. Silva T.M. Bacteria-induced phagocyte secondary necrosis as a pathogenicity mechanism. J. Leuk. Biology. 2010, 88 (5): 885-896.

15. Spinner J.L., Seo K.S., O’Loughlin J.L. et al. Neutrophils are resistant to Yersinia YopJ/P-induced apoptosis and are protected from ROS-mediated cell death by the type III secretion system. PLoS ONE. 2010. 5(2): e9279. Doi: 10.1371/journal.pone. 0009279.

16. Spinner J.L., Cundiff J.A., Kobayashi S.D. Yersinia pestis type III secrenion system-dependent inhibition of human polymorphonuclear leukocyte function. Infect. Immunity. 2008, 76 (8): 3754-3760.

17. Zhang Y, Bliska B. Role of macrophage apoptosis in the pathogenesis of Yersinia. Curr. Top. Microb. Immunol. 2005, 289: 151-174.

Journal of microbiology, epidemiology and immunobiology. 2017; : 3-9

FLOW-CYTOFLUORIMETRIC ANALYSIS OF CYTOTOXICITY OF YERSINIA PESTIS STRAINS

Sazanova E. V., Shmelkova T. P., Kravtsov A. L., Malyukova T. A., Popov Yu. A.

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-6-3-9

Abstract

Aim. Study cytotoxic effect of Yersinia pestis strains with various degree of virulence on leukocytes of whole defibrinated human blood. Materials and methods. 15 strains of Y. pestis were used in the study. DNA histograms were registered using flow cytofluorimeter. Results. Possibility of using cytotoxicity to differentiate Y. pestis into virulent and avirulent w^fas experimentally proven. The data obtained was comparable with LD₅o for mice and did not contradict molecular-genetic characteristics of the strains. Conclusion. The approach proposed allows to obtain reliable results and is perspective for evaluation of virulence for Y. pestis strains.

References

1. Kozinets G.I., Vysotskii V.V., Pogorelov V.M., Erovichenkov A.A., Malov V.A. Krov' i infektsiya. M., Triada-Farm, 2001.

2. Kravtsov A.L., Pilipenko T.Yu., Korovkin S.A., Naumov A.V. Sposob otsenki fagotsitoza. A.s. 1522923 SSSR, MKI G 01 № 33/53. № 4014143. Izobreteniya. 1994, 4: 187.

3. Laboratornaya diagnostika opasnykh infektsionnykh boleznei. Prakticheskoe rukovodstvo. G.G.Onishenko, V.V. Kutyrev (red.). M., Shiko, 2013.

4. Poryadok organizatsii i provedeniya laboratornoi diagnostiki chumy dlya laboratorii territorial'nogo, regional'nogo i federal'nogo urovnei. Metodicheskie ukazaniya. MUK 4.2.2940-11.

5. Pustovalov V.L., Vasil'eva G.I., Kiseleva A.K. Ustoichivost' k fagotsitozu shtammov chumnogo mikroba v zavisimosti ot temperatury kul'tivirovaniya. Voprosy profilaktiki prirodnoochagovykh infektsii. Saratov, 1983, s. 16-21.

6. Khaidukov S.V., Zurochka A.V. Voprosy sovremennoi protochnoi tsitometrii. Klinicheskoe primenenie. Izd-vo Chelyabinskaya gosudarstvennaya meditsinskaya akademiya, Chelyabinsk. 2008. /

7. Shmel'kovaT.P., Kravtsov A.L, ShchukovskayaT.N., LyapinM.N., Kostyukova T.A., Malyukova T.A., Golovko E.M., Vidyaeva N.A., Konnov N.P. Vliyanie biologicheskikh svoistv chumnogo mikroba na razvitie apoptoza leikotsitov krovi cheloveka v sisteme in vitro. Problemy osobo opasnykh infektsii. 2007, 1: 85-89.

8. Shmel'kova T.P., Sazanova E.V., Kravtsov A.L., Malyukova T.A., Popov Yu.A., Boiko A.V. Devdariani Z.L., Shchukovskaya T.N. Opredelenie virulentnykh svoistv patogennykh mikroorganizmov in vitro: sostoyanie voprosa. Zhuri, mikrobiol. 2016, 6: 100-110.

9. Bashaw J., Norris S., Weeks S. et al. Development of in vitro correlate assay of immunity to infection with Yersinia pestis. Clin, And. Vaccine Immunology. 2007, 14 (5): 605-616.

10. Bubeck S.S., Cantwell A.M., Dube P.H. Delayed inflammatory response to primary pneumonic plague occurs in both outbred and inbred mice. Infection and Immunity. 2007, 75 (2): 697-705.

12. Parrino J., Hotchkiss R.S., BrayM. Preventation of immunecell apoptosis as potential therapeutic strategy for severe infections. Emerg. Infect. Dis. 2007, 13 (2): 191-198.

13. Silva T.M. et al. Secondary necrosis in multicellular animals: an outcome of apoptosis with pathogenic implications. Apoptosis. 2008, 13: 463-482.

14. Silva T.M. Bacteria-induced phagocyte secondary necrosis as a pathogenicity mechanism. J. Leuk. Biology. 2010, 88 (5): 885-896.

16. Spinner J.L., Cundiff J.A., Kobayashi S.D. Yersinia pestis type III secrenion system-dependent inhibition of human polymorphonuclear leukocyte function. Infect. Immunity. 2008, 76 (8): 3754-3760.

17. Zhang Y, Bliska B. Role of macrophage apoptosis in the pathogenesis of Yersinia. Curr. Top. Microb. Immunol. 2005, 289: 151-174.

ПРОТОЧНО-ЦИТОФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ШТАММОВ YERSINIA PESTIS

Аннотация

FLOW-CYTOFLUORIMETRIC ANALYSIS OF CYTOTOXICITY OF YERSINIA PESTIS STRAINS

Abstract

События