ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ, МЕЧЕННЫХ НАНОЧАСТИЦАМИ КОЛЛОИДНОГО ЗОЛОТА, ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ БОТУЛИНИЧЕСКОГО ТОКСИНА В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Статья в Elpub

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2017; : 31-35

ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ, МЕЧЕННЫХ НАНОЧАСТИЦАМИ КОЛЛОИДНОГО ЗОЛОТА, ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ БОТУЛИНИЧЕСКОГО ТОКСИНА В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Загоскина Т. Ю., Чапоргина Е. Л., Марков Е. Ю., Попова Ю. О., Долгова Т. М., Гаврилова О. В., Гайкова Г. С., Балахонов С. В.

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-4-31-35

Аннотация

Цель. Конструирование тест-системы для дот-иммуноанализа с использованием наночастиц коллоидного золота в качестве маркера специфических антител для детекции ботулинического токсина в клиническом материале и пищевых продуктах. Материалы и методы. В качестве маркера специфических антител использовали наночастицы золота с диаметром частиц 20 нм. IgG выделяли из поливалентной сыворотки диагностической против ботулотоксинов типов А, В, С, Е, F производства НПО «Аллерген» (Ставрополь) активностью 5000 - 10 000 ME. Ботулотоксин в клиническом материале (сыворотки крови ) от 3 больных с установленным клиническим диагнозом «ботулизм», а также пищевом продукте (солянка грибная домашняя) определяли методом дот-иммуноанализа на нитроцеллюлозной мембране. Результаты. Во всех исследованных образцах (сыворотки крови от 3 больных и солянка грибная домашняя) обнаружен ботулинический токсин, который регистрировался у больного № 1 в разведении исследуемого образца 1:2112, у больного №2 - 1:32, у больного № 3 - 1:1056, в пищевом продукте - 1:8. В отрицательном контроле (чистые культуры возбудителей дизентерии и кишечного иерсиниоза, сыворотках крови больного ОКИ и здорового человека, а также в консервированной фасоли в томатном соусе и консервированном зеленом горошке) ботулотоксин не обнаруживали. Заключение. Разработана высокочувствительная специфичная тест-система для дот-иммуноанализа на основе коммерческих противоботулинических антител, меченных частицами коллоидного золота, которая позволяет обнаруживать ботулотоксины в течение 2 ч в объеме 1 - 2 мкл исследуемого образца.

Список литературы

1. Загоскина Т.Ю., Балахонов С.В., Марков Е.Ю., Николаев В,Б., Субычева Е.Н., Чапоргина Е.А., Михайлов Е.П., Бодрых О.Б., Попова Ю.О. Апробация диагностических тест-систем с использованием наночастиц серебра в качестве маркеров специфических антител для скрининга исследуемого материала на наличие антигенов возбудителей чумы, бруцеллеза, туляремии и ботулотоксина в дот-иммуноанализе. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2014, 4: 61-64.

2. Загоскина Т.Ю., Голубинский Е.П., Меринов С.ГГ, Полтавченко А.Г., Марков Е.Ю. Современные подходы к конструированию диагностических тест-систем с использованием неорганических корпускулярных меток. Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2004, 1 (2): 176-180.

3. Загоскина Т.Ю., Калиновский А.И., Марков Е.Ю., Докорина А.А., Голубинский Е.П. Использование специфических антител, меченных частицами коллоидного серебра, для выявления антигенов бруцелл методом дот-иммуноанализа. Клин. лаб. диагностика. 2002, 6; 38-39.

4. Загоскина Т.Ю., Чеснокова М.В., Климов В.Т., ПоповаЮ.О., Марков Е.Ю., Старикова О.А. Конструирование тест-системы с наночастицами коллоидного серебра для обнаружения возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в дот-иммуноанализе. Журн. микробиол. 2017, 1: 55-61.

5. Картужанский АЛ., Красный-Адмони Л.В. Химия и физика фотографического процесса. Л., Химия, 1987.

6. Носкова О.А., Загоскина Т.Ю., Субычева Е.Н., Марков Е.Ю., Попова Ю.О., Гриднева Л.Г, Михайлов Е.П. Применение дот-иммуноанализа для выявления антигенов чумного микроба в полевом материале. Проблемы особо опасных инфекций. 2014, 3: 69-71,

7. McKinney М.М., Parkinson A. A simple, non-chromatographic procedure to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid. J. Immunol. Meth. 1987, 96 (2): 271-278.

8. Panfilova E., Shirokov A., KhlebtsovB. etal. Multiplexed dot immunoassay using Ag nanocubes, Au/Ag alloy nanoparticles, and Au/Ag nanocages. Nano Research. 2012, 5 (2): 124-134.

Journal of microbiology, epidemiology and immunobiology. 2017; : 31-35

DOT-IMMUNOASSAY USING GOLD NANOPARTICLE MARKED COLLOID GOLD FOR THE DETECTION OF BOTULINIC TOXIN IN CLINICAL MATERIAL AND FOOD PRODUCTS

Zagoskina T. Yu., Chaporgina E. L., Markov E. Yu., Popova Yu. O., Dolgova T. M., Gavrilova O. V., Taikova T. S., Balakhonov S. V.

https://doi.org/10.36233/0372-9311-2017-4-31-35

Abstract

Aim. Construction of test-systems for dot-immunoassay using colloid gold nanoparticles as a marker of specific antibodies for the detection of botulinic toxin in clinical material and food products. Materials and methods. 20 nm gold nanoparticles were used as a marker of specific antibodies. IgGs were isolated from polyvalent diagnostic sera against type А, В, С, E, F botulin toxins produced by SPC Allergen (Stavropol) with 5000 - 10 000 ME activity. Botulin toxin in clinical material (blood sera) from 3 patients with established botulism clinical diagnosis as well as food product (home-made mushroom soup solyanka) was determined by dot immunoassay on nitrocellulose membrane. Results. Botulin toxin was detected in all the studied samples (blood sera from 3 patients and the soup) that was registered in the patient No. 1 at the 1:2112 dilution of fhe studied sample, in patient No. 2 - 1:32, in patients No. 3 - 1:1056, in the food product - 1:8. Botulin toxin was not detected in the negative control (pure cultures of the dysentery cauzative agents and intestine yersinosis, blood sera of the patient with All and a healthy individual as well as canned beans in tomato sauce and canned green peas). Conclusion. A highly sensitive specific test-system was developed for dot-immunoassay based on the commercial anti-botulin antibodies labelled with colloid gold particles that allows to detect botulin toxins within 2 hours in the sample volume of 1 - 2 microlites .

References

1. Zagoskina T.Yu., Balakhonov S.V., Markov E.Yu., Nikolaev V,B., Subycheva E.N., Chaporgina E.A., Mikhailov E.P., Bodrykh O.B., Popova Yu.O. Aprobatsiya diagnosticheskikh test-sistem s ispol'zovaniem nanochastits serebra v kachestve markerov spetsificheskikh antitel dlya skrininga issleduemogo materiala na nalichie antigenov vozbuditelei chumy, brutselleza, tulyaremii i botulotoksina v dot-immunoanalize. Epidemiologiya i vaktsinoprofilaktika. 2014, 4: 61-64.

2. Zagoskina T.Yu., Golubinskii E.P., Merinov S.GG, Poltavchenko A.G., Markov E.Yu. Sovremennye podkhody k konstruirovaniyu diagnosticheskikh test-sistem s ispol'zovaniem neorganicheskikh korpuskulyarnykh metok. Byull. VSNTs SO RAMN. 2004, 1 (2): 176-180.

3. Zagoskina T.Yu., Kalinovskii A.I., Markov E.Yu., Dokorina A.A., Golubinskii E.P. Ispol'zovanie spetsificheskikh antitel, mechennykh chastitsami kolloidnogo serebra, dlya vyyavleniya antigenov brutsell metodom dot-immunoanaliza. Klin. lab. diagnostika. 2002, 6; 38-39.

4. Zagoskina T.Yu., Chesnokova M.V., Klimov V.T., PopovaYu.O., Markov E.Yu., Starikova O.A. Konstruirovanie test-sistemy s nanochastitsami kolloidnogo serebra dlya obnaruzheniya vozbuditelei psevdotuberkuleza i kishechnogo iersinioza v dot-immunoanalize. Zhurn. mikrobiol. 2017, 1: 55-61.

5. Kartuzhanskii AL., Krasnyi-Admoni L.V. Khimiya i fizika fotograficheskogo protsessa. L., Khimiya, 1987.

6. Noskova O.A., Zagoskina T.Yu., Subycheva E.N., Markov E.Yu., Popova Yu.O., Gridneva L.G, Mikhailov E.P. Primenenie dot-immunoanaliza dlya vyyavleniya antigenov chumnogo mikroba v polevom materiale. Problemy osobo opasnykh infektsii. 2014, 3: 69-71,

7. McKinney M.M., Parkinson A. A simple, non-chromatographic procedure to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid. J. Immunol. Meth. 1987, 96 (2): 271-278.

8. Panfilova E., Shirokov A., KhlebtsovB. etal. Multiplexed dot immunoassay using Ag nanocubes, Au/Ag alloy nanoparticles, and Au/Ag nanocages. Nano Research. 2012, 5 (2): 124-134.

Аннотация

DOT-IMMUNOASSAY USING GOLD NANOPARTICLE MARKED COLLOID GOLD FOR THE DETECTION OF BOTULINIC TOXIN IN CLINICAL MATERIAL AND FOOD PRODUCTS

Abstract

События