СОВРЕМЕННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ И НАПРАВЛЕНИЯ РАЗВИТИЯ МОЛЕКУЛЯРНОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА В НАДЗОРЕ ЗА ЭНТЕРОВИРУСНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ. ОПЫТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Статья в Elpub

Инфекция и иммунитет. 2018; 8: 452-464

СОВРЕМЕННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ И НАПРАВЛЕНИЯ РАЗВИТИЯ МОЛЕКУЛЯРНОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА В НАДЗОРЕ ЗА ЭНТЕРОВИРУСНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ. ОПЫТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Лукашев А. Н., Голицына Л. Н., Вакуленко Ю. А., Ахмадишина Л. В., Романенкова Н. И., Сапега Е. Ю., Морозова Н. С., Новикова Н. А., Троценко О. Е., Иванова О. Е.

https://doi.org/10.15789/2220-7619-2018-4-452-464

Аннотация

Резюме. Энтеровирусы — мелкие РНК-содержащие вирусы, которые распространены повсеместно и регулярно становятся причиной вспышек заболеваемости с различной симптоматикой. В Российской Федерации с 2006 г. действует надзор за энтеровирусами. За эти годы в России и в мире были отработаны молекулярно-биологические и биоинформатические инструменты для изучения эпидемиологии энтеровирусов. В настоящее время идентификация энтеровирусов в мире осуществляется практически исключительно на основании анализа нуклеотидной последовательности области генома VP1 (около 900 нуклеотидов). При этом в рутинной работе определяется только фрагмент этой области генома (около 300 нуклеотидов). В большинстве случаев этого достаточно, чтобы достоверно типировать вирус, однако точность анализа короткого участка генома ниже, и достоверным критерием типа для короткого фрагмента следует считать 80% сходства нуклеотидной последовательности, а не 75%, как в случае полной области генома VP1. Для даль нейшего анализа полученных нуклеотидных последовательностей в настоящее время широко применяются Байесовы филогенетические методики, которые позволяют использовать метод молекулярных часов в расследовании вспышек заболеваемости. Энтеровирусы накапливают порядка 0,5–1% нуклеотидных замен в год, поэтому даже короткий фрагмент генома позволяет анализировать филодинамику вирусов на уровне передачи между странами или смены циркулирующего варианта вируса. На более короткой временной шкале короткий фрагмент ограниченно пригоден для изучения молекулярной эпидемиологии, поскольку позволяет достоверно различать не более 1–2 случаев передачи вируса в год. Таким образом, для расследования вспышек желательно определение нуклеотидной последовательности полной области генома VP1 или полногеномной последовательности. В результате анализа имеющихся в базах данных нуклеотидных последовательностей энтеровирусов все более очевидными становятся ограничения, связанные с неравномерной эффективностью надзора в разных странах мира и короткой длиной фрагмента генома, определяемой при рутинном надзоре. Как следствие, полноценный анализ молекулярной эпидемиологии энтеровирусов в глобальном масштабе остается проблематичным. Количество известных нуклеотидных последовательностей энтеровирусов за последние 20 лет выросло в сотни раз, однако понимание закономерностей возникновения вспышек энтеровирусной инфекции практически отсутствует. Эффективное развитие надзора за энтеровирусами потребует внедрения новых методов исследования сточных вод, экономически эффективного высокопроизводительного секвенирования, гармонизации систем надзора в разных странах мира.

Список литературы

1. Голицына Л.Н., Зверев В.В., Парфенова О.В., Новикова Н.А. Эпидемические варианты неполиомиелитных энтеровирусов в России // Медицинский альманах. 2015. Т. 40, № 5. С. 136–140. [Golitsyna L.N., Zverev V.V., Parfenova O.V., Novikova N.A. Epidemic variants of non-poliomyelitic enteroviruses in Russia. Meditsinskii al’manakh = Medical Almanac, 2015, vol. 40, no. 5, pp. 136–140. (In Russ.)]

2. Лашкевич В.А., Королева Г.А., Лукашев А.Н., Денисова Е.В., Катаргина Л.А., Хорошилова-Маслова И.П. Острый энтеровирусный увеит у детей младшего возраста // Вопросы вирусологии. 2005. T. 50, № 3. C. 36–45. [Lashkevich V.A., Koroleva G.A., Lukashev A.N., Denisova E.V., Katargina L.A., Khoroshilova-Maslova I.P. Acute enterovirus uveitis in young children. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2005, vol. 50, no. 3, pp. 36–45. (In Russ.)]

3. Лукашев А.Н. Роль рекомбинации в эволюции энтеровирусов // Вопросы вирусологии. 2005. T. 50, № 3. C. 46–52. [Lukashev A.N. Role of recombination in evolution of enteroviruses. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2005, vol. 50, no. 3, pp. 46–52. (In Russ.)]

4. Лукашев А.Н., Резник В.И., Иванова О.Е., Еремеева Т.П., Каравянская Т.Н., Перескокова М.А., Лебедева Л.А., Лашкевич В.А., Михайлов М.И. Молекулярная эпидемиология вируса ЕСНО 6 — возбудителя вспышки серозного менингита в Хабаровске в 2006 г. // Вопросы вирусологии. 2008. Т. 53, № 1. C. 16–21. [Lukashev A.N., Reznik V.I., Ivanova O.E., Eremeyeva T.P., Karavyanskaya T.N., Pereskokova M.A., Lebedeva L.A., Lashkevich V.A., Mikhallov M.I. Molecular epidemiolo gy of ECHO 6 virus, the causative agent of the 2006 outbreak of serous meningitis in Khabarovsk. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2008, vol. 53, no. 1, pp. 16–21. (In Russ.)]

5. Устюжанин А.В., Резайкин А.В., Сергеев А.Г., Снитковская Т.Э. Значение молекулярно-генетического мониторинга в оценке степени вирулентности и эпидемической значимости штаммов неполиомиелитных энтеровирусов, циркулирующих среди населения // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2015. Т. 52, № 1. С. 72–76. [Ustyuzhanin A.V., Rezaykin A.V., Sergeev A.G., Snitkovskaya T.E. Molecular genetic surveillance of circulating human nonpoliomyelitis viruses strains: implications for the estimates of epidemic significance and virulence. Vestnik Ural’skoi meditsinskoi akademicheskoi nauki = Journal of Ural Medical Academic Science, 2015, vol. 52, no. 1, pp. 72–76. (In Russ.)]

6. Akhmadishina L.V., Govorukhina M.V., Kovalev E.V., Nenadskaya S.A., Ivanova O.E., Lukashev A.N. Enterovirus A71 meningoencephalitis outbreak, Rostov-on-Don, Russia, 2013. Emerg. Infect. Dis., 2015, vol. 21, no. 8, pp. 1440–1443. doi: 10.3201/eid2108.141084

7. Bailly J.L., Mirand A., Henquell C., Archimbaud C., Chambon M., Charbonne F., Traore O., Peigue-Lafeuille H. Phylogeography of circulating populations of human echovirus 30 over 50 years: nucleotide polymorphism and signature of purifying selection in the VP1 capsid protein gene. Infect. Genet. Evol., 2009, vol. 9, no. 4, pp. 699–708. doi: 10.1016/j.meegid.2008.04.009

8. Brown B.A., Maher K., Flemister M.R., Naraghi-Arani P., Uddin M., Oberste M.S., Pallansch M.A. Resolving ambiguities in genetic typing of human enterovirus species C clinical isolates and identification of enterovirus 96, 99 and 102. J. Gen. Virol., 2009, vol. 90, no. 7, pp. 1713–1723. doi: 10.1099/vir.0.008540-0

9. Centers for Disease Control and Prevention. Certification of poliomyelitis eradication — European Region, June 2002. MMWR Morb. Mortal. Wkly Rep., 2002, vol. 51, no. 26, pp. 572–574.

10. Chumakov K.M., Powers L.B., Noonan K.E., Roninson I.B., Levenbook I.S. Correlation between amount of virus with altered nucleotide sequence and the monkey test for acceptability of oral poliovirus vaccine. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, vol. 88, no. 1, pp. 199–203.

11. Drummond A.J., Rambaut A. BEAST: Bayesian evolutionary analysis by sampling trees. BMC Evol. Biol., 2007, vol. 7, pp. 214. doi: 10.1186/1471-2148-7-214

12. Gaunt E., Harvala H., Osterback R., Sreenu V.B., Thomson E., Waris M., Simmonds P. Genetic characterization of human coxsackievirus A6 variants associated with atypical hand, foot and mouth disease: a potential role of recombination in emergence and pathogenicity. J. Gen. Virol., 2015, vol. 96, no. 5, pp. 1067–1079. doi: 10.1099/vir.0.000062

13. Hassel C., Mirand A., Lukashev A., Terletskaialadwig E., Farkas A., Schuffenecker I., Diedrich S., Huemer H.P., Archimbaud C., Peigue-Lafeuille H., Henquell C., Bailly J.L. Transmission patterns of human enterovirus 71 to, from and among European countries, 2003 to 2013. Euro Surveill., 2015, vol. 20, no. 34. doi: 10.2807/1560-7917.ES.2015.20.34.30005

14. Ho M., Chen E.R., Hsu K.H., Twu S.J., Chen K.T., Tsai S.F., Wang J.R., Shih S.R. An epidemic of enterovirus 71 infection in Taiwan. Taiwan Enterovirus Epidemic Working Group. N. Engl. J. Med., 1999, vol. 341, no. 13, pp. 929–935. doi: 10.1056/NEJM199909233411301

15. Khetsuriani N., Lamonte-Fowlkes A., Oberste S., Pallansch M.A. Enterovirus surveillance — United States, 1970–2005. MMWR Surveill. Summ., 2006, vol. 55, no. 8, pp. 1–20.

16. Lancaster K.Z., Pfeiffer J.K. Mechanisms controlling virulence thresholds of mixed viral populations. J. Virol., 2011, vol. 85, no. 19, pp. 9778–9788. doi: 10.1128/JVI.00355-11

17. Lemey P., Rambaut A., Welch J.J., Suchard M.A. Phylogeography takes a relaxed random walk in continuous space and time. Mol. Biol. Evol., 2010, vol. 27, no. 8, pp. 1877–1885. doi: 10.1093/molbev/msq067

18. Liste M.B., Natera I., Suarez J.A., Pujol F.H., Liprandi F., Ludert J.E. Enteric virus infections and diarrhea in healthy and human immunodeficiency virus-infected children. J. Clin. Microbiol., 2000, vol. 38, no. 8, pp. 2873–2877.

19. Liu W., Wu S., Xiong Y., Li T., Wen Z., Yan M., Qin K., Liu Y., Wu J. Co-circulation and genomic recombination of coxsackievirus A16 and enterovirus 71 during a large outbreak of hand, foot, and mouth disease in Central China. PLoS One, 2014, vol. 9, no. 4: e96051. doi: 10.1371/journal.pone.0096051

20. Lukashev A.N., Lashkevich V.A., Ivanova O.E., Koroleva G.A., Hinkkanen A.E., Ilonen J. Recombination in circulating enteroviruses. J. Virol., 2003, vol. 77, no. 19, pp. 10423–10431. doi: 10.1128/JVI.77.19.10423-10431.2003

21. Lukashev A.N., Lashkevich V.A., Ivanova O.E., Koroleva G.A., Hinkkanen A.E., Ilonen J. Recombination in circulating enterovirus B: independent evolution of structural and non-structural genome regions. J. Gen. Virol., 2005, vol. 86, no. 12, pp. 3281– 3290. doi: 10.1099/vir.0.81264-0

22. Lukashev A.N., Vakulenko Y.A. Molecular evolution of types in non-polio enteroviruses. J. Gen. Virol., 2017, vol. 98, no. 12, pp. 2968–2981. doi: 10.1099/jgv.0.000966

23. McMinn P.C. Recent advances in the molecular epidemiology and control of human enterovirus 71 infection. Curr. Opin. Virol., 2012, vol. 2, no. 2, pp. 199–205. doi: 10.1016/j.coviro.2012.02.009

24. McWilliam Leitch E.C., Bendig J., Cabrerizo M., Cardosa J., Hyypia T., Ivanova O.E., Kelly A., Kroes A.C., Lukashev A., MacAdam A., McMinn P., Roivainen M., Trallero G., Evans D.J., Simmonds P. Transmission networks and population turnover of echovirus 30. J. Virol., 2009, vol. 83, no. 5, pp. 2109–2118. doi: 10.1128/JVI.02109-08

25. McWilliam Leitch E.C., Cabrerizo M., Cardosa J., Harvala H., Ivanova O.E., Koike S., Kroes A.C., Lukashev A., Perera D., Roivainen M., Susi P., Trallero G., Evans D.J., Simmonds P. The association of recombination events in the founding and emergence of subgenogroup evolutionary lineages of human enterovirus 71. J. Virol., 2012, vol. 86, no. 5, pp. 2676–2685. doi: 10.1128/JVI.06065-11

26. McWilliam Leitch E.C., Cabrerizo M., Cardosa J., Harvala H., Ivanova O.E., Kroes A.C., Lukashev A., Muir P., Odoom J., Roivainen M., Susi P., Trallero G., Evans D.J., Simmonds P. Evolutionary dynamics and temporal/geographical correlates of recombination in the human enterovirus echovirus types 9, 11, and 30. J. Virol., 2010, vol. 84, no. 18, pp. 9292–9300. doi: 10.1128/JVI.00783-10

27. Nasri D., Bouslama L., Omar S., Saoudin H., Bourlet T., Aouni M., Pozzetto B., Pillet S. Typing of human enterovirus by partial sequencing of VP2. J. Clin. Microbiol., 2007, vol. 45, no. 8, pp. 2370–2379. doi: 10.1128/JCM.00093-07

28. Nomoto A. Molecular aspects of poliovirus pathogenesis. Proc. Jpn. Acad. Ser. B Phys. Biol. Sci., 2007, vol. 83, no. 8, pp. 266–275. doi: 10.2183/pjab/83.266

29. Oberste M.S., Maher K., Kilpatrick D. R., Flemister M.R., Brown B.A., Pallansch M.A. Typing of human enteroviruses by partial sequencing of VP1. J. Clin. Microbiol., 1999, vol. 37, pp. 1288–1293.

30. Oberste M.S., Maher K., Kilpatrick D.R., Pallansch M.A. Molecular evolution of the Human enteroviruses: correlation of serotype with VP1 sequence and application to picornavirus classification. J. Virol., 1999, vol. 73, pp. 1941–1948.

31. Oberste M.S., Nix W.A., Kilpatrick D.R., Flemister M.R., Pallansch M.A. Molecular epidemiology and type-specific detection of echovirus 11 isolates from the Americas, Europe, Africa, Australia, southern Asia and the Middle East. Virus Res., 2003, vol. 91, pp. 241–248. doi: 10.1016/S0168-1702(02)00291-5

32. Palacios G., Oberste M.S. Enteroviruses as agents of emerging infectious diseases. J. Neurovirol., 2005, vol. 11, no. 5, pp. 424–433. doi: 10.1080/13550280591002531

33. Puenpa J., Vongpunsawad S., Osterback R., Waris M., Eriksson E., Albert J., Midgley S., Fischer T.K., Eis-Hubinger A.M., Cabrerizo M., Gaunt E., Simmonds P., Poovorawan Y. Molecular epidemiology and the evolution of human coxsackievirus A6. J. Gen. Virol., 2016, vol. 97, no. 12, pp. 3225–3231. doi: 10.1099/jgv.0.000619

34. Savolainen-Kopra C., Paananen A., Blomqvist S., Klemola P., Simonen M.L., Lappalainen M., Vuorinen T., Kuusi M., Lemey P., Roivainen M. A large Finnish echovirus 30 outbreak was preceded by silent circulation of the same genotype. Virus Genes, 2011, vol. 42, no. 1, pp. 28–36. doi: 10.1007/s11262-010-0536-x

35. Simonen-Tikka M.L., Hiekka A.K., Klemola P., Poussa T., Ludvigsson J., Korpela R., Vaarala O., Roivainen M. Early human enterovirus infections in healthy Swedish children participating in the PRODIA pilot study. J. Med. Virol., 2012, vol. 84, no. 6, pp. 923–930. doi: 10.1002/jmv.23284

36. Solmone M., Vincenti D., Prosperi M.C., Bruselles A., Ippolito G., Capobianchi M.R. Use of massively parallel ultradeep pyrosequencing to characterize the genetic diversity of hepatitis B virus in drug-resistant and drug-naive patients and to detect minor variants in reverse transcriptase and hepatitis B S antigen. J. Virol., 2009, vol. 83, no. 4, pp. 1718–1726. doi: 10.1128/JVI.02011-08

37. Tamura K., Stecher G., Peterson D., Filipski A., Kumar S. MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0. Mol. Biol. Evol., 2013, vol. 30, no. 12, pp. 2725–2729. doi: 10.1093/molbev/mst197

38. Van der Sanden S.M., Koopmans M.P., van der Avoort H.G. Detection of human enteroviruses and parechoviruses as part of the national enterovirus surveillance in the Netherlands, 1996-2011. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 2013, vol. 32, no. 12, pp. 1525– 1531. doi: 10.1007/s10096-013-1906-9

39. Witso E., Palacios G., Cinek O., Stene L.C., Grinde B., Janowitz D., Lipkin W.I., Ronningen K.S. High prevalence of human enterovirus a infections in natural circulation of human enteroviruses. J. Clin. Microbiol., 2006, vol. 44, no. 11, pp. 4095–4100. doi: 10.1128/JCM.00653-06

40. Wright P.W., Strauss G.H., Langford M.P. Acute hemorrhagic conjunctivitis. Am. Fam. Physician, 1992, vol. 45, no. 1, pp. 173–178.

41. Yakovenko M.L., Gmyl A.P., Ivanova O.E., Eremeeva T.P., Ivanov A.P., Prostova M.A., Baykova O.Y., Isaeva O.V., Lipskaya G.Y., Shakaryan A.K., Kew O.M., Deshpande J.M., Agol V.I. The 2010 outbreak of poliomyelitis in Tajikistan: epidemiology and lessons learnt. Euro Surveill., 2014, vol. 19, no. 7, pp. 20706.

42. Yarmolskaya M.S., Shumilina E.Y., Ivanova O.E., Drexler J.F., Lukashev A.N. Molecular epidemiology of echoviruses 11 and 30 in Russia: different properties of genotypes within an enterovirus serotype. Infect. Genet. Evol., 2015, vol. 30, pp. 244–248. doi: 10.1016/j.meegid.2014.12.033

Russian Journal of Infection and Immunity. 2018; 8: 452-464

CURRENT POSSIBILITIES AND POTENTIAL DEVELOPMENT OF MOLECULAR ENTEROVIRUS SURVEILLANCE. EXPERIENCE OF RUSSIAN FEDERATION

Lukashev A. N., Golitsina L. N., Vakulenko Y. A., Akhmadishina L. V., Romanenkova N. I., Sapega E. Yu., Morozova N. S., Novikova N. A., Trotsenko O. E., Ivanova O. E.

https://doi.org/10.15789/2220-7619-2018-4-452-464

Abstract

Abstract. Enteroviruses are small RNA viruses, which are ubiquitous and commonly cause outbreaks with various clinical manifestations. In 2006, the Program on enterovirus surveillance was approved in the Russian Federation. Over the last years, molecular-biological and bioinformatics methods for enterovirus epidemiology studies have been developed both in Russia and worldwide. Currently, identification of enteroviruses is carried out by analyzing nucleotide sequence of the full-length VP1 genome region (ca. 900 nt). Routinely, it is sufficient to obtain a partial VP1 genome region sequence (ca. 300 bp) for enteroviruse verification in most cases; however, a more stringent type criterion of 80% sequence identity should be used compared to the 75% sequence identity cut-off for the complete VP1 genome region. Further sequence analysis may be performed by using Bayesian phylogenetic methods, which allow using molecular clock to trace outbreak emergence. Enteroviruses accumulate about 0.5–1% nucleotide substitutions per year. Therefore, a short genome fragment may be used to analyze virus phylodynamics at the level of international transfers and circulating virus variants. On a shorter timescale, a full-length VP1 genome region or a complete genome sequence are preferred for investigating molecular epidemiology, because a short sequence allows to reliably distinguish not more than 1–2 transmission events per year. Thus, determining enterovirus sequences for full-length VP1 genome region or full-genome sequence is preferred for examining viral outbreaks. It is increasingly apparent that analyzing available enterovirus nucleotide sequences reveals limitations related to uneven surveillance efficacy in various countries and short length of genome fragment measured in routine control. As a result, a proper global-scale analysis of enterovirus molecular epidemiology remains problematic. Over the last 20 years, the number of available enterovirus nucleotide sequences increased by hundred times, but understanding emergence of enterovirus infection outbreaks remains limited. Further development of enterovirus surveillance would require new methods for sewage monitoring, affordable high-throughput sequencing and harmonization of global surveillance systems.

References

1. Golitsyna L.N., Zverev V.V., Parfenova O.V., Novikova N.A. Epidemicheskie varianty nepoliomielitnykh enterovirusov v Rossii // Meditsinskii al'manakh. 2015. T. 40, № 5. S. 136–140. [Golitsyna L.N., Zverev V.V., Parfenova O.V., Novikova N.A. Epidemic variants of non-poliomyelitic enteroviruses in Russia. Meditsinskii al’manakh = Medical Almanac, 2015, vol. 40, no. 5, pp. 136–140. (In Russ.)]

2. Lashkevich V.A., Koroleva G.A., Lukashev A.N., Denisova E.V., Katargina L.A., Khoroshilova-Maslova I.P. Ostryi enterovirusnyi uveit u detei mladshego vozrasta // Voprosy virusologii. 2005. T. 50, № 3. C. 36–45. [Lashkevich V.A., Koroleva G.A., Lukashev A.N., Denisova E.V., Katargina L.A., Khoroshilova-Maslova I.P. Acute enterovirus uveitis in young children. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2005, vol. 50, no. 3, pp. 36–45. (In Russ.)]

3. Lukashev A.N. Rol' rekombinatsii v evolyutsii enterovirusov // Voprosy virusologii. 2005. T. 50, № 3. C. 46–52. [Lukashev A.N. Role of recombination in evolution of enteroviruses. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2005, vol. 50, no. 3, pp. 46–52. (In Russ.)]

4. Lukashev A.N., Reznik V.I., Ivanova O.E., Eremeeva T.P., Karavyanskaya T.N., Pereskokova M.A., Lebedeva L.A., Lashkevich V.A., Mikhailov M.I. Molekulyarnaya epidemiologiya virusa ESNO 6 — vozbuditelya vspyshki seroznogo meningita v Khabarovske v 2006 g. // Voprosy virusologii. 2008. T. 53, № 1. C. 16–21. [Lukashev A.N., Reznik V.I., Ivanova O.E., Eremeyeva T.P., Karavyanskaya T.N., Pereskokova M.A., Lebedeva L.A., Lashkevich V.A., Mikhallov M.I. Molecular epidemiolo gy of ECHO 6 virus, the causative agent of the 2006 outbreak of serous meningitis in Khabarovsk. Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2008, vol. 53, no. 1, pp. 16–21. (In Russ.)]

5. Ustyuzhanin A.V., Rezaikin A.V., Sergeev A.G., Snitkovskaya T.E. Znachenie molekulyarno-geneticheskogo monitoringa v otsenke stepeni virulentnosti i epidemicheskoi znachimosti shtammov nepoliomielitnykh enterovirusov, tsirkuliruyushchikh sredi naseleniya // Vestnik Ural'skoi meditsinskoi akademicheskoi nauki. 2015. T. 52, № 1. S. 72–76. [Ustyuzhanin A.V., Rezaykin A.V., Sergeev A.G., Snitkovskaya T.E. Molecular genetic surveillance of circulating human nonpoliomyelitis viruses strains: implications for the estimates of epidemic significance and virulence. Vestnik Ural’skoi meditsinskoi akademicheskoi nauki = Journal of Ural Medical Academic Science, 2015, vol. 52, no. 1, pp. 72–76. (In Russ.)]