Ретинобластома – это агрессивное онкологическое заболевание глаза, происходящее из клеток-предшественников фоторецепторов сетчатки, наиболее часто дебютирующее в детском возрасте. У 98% пациентов ретинобластома инициируется биаллельной инактивацией гена RB1, играющего важную роль в регуляции клеточного цикла и поддержании стабильности генома. Около 40% нарушений в гене RB1 являются герминальными. Цель исследования – анализ частоты герминальных нарушений гена RB1 и их связи с клиническим фенотипом в группе белорусских пациентов с ретинобластомой. В исследование включено 20 пациентов из неродственных семей (9 пациентов с монолатеральной ретинобластомой, 11 – с билатеральной). У 2 из 11 пациентов с билатеральной ретинобластомой отмечен семейный анамнез заболевания. Геномную ДНК выделяли из суспензии лейкоцитов периферической крови. С полученной ДНК ставили серию ПЦР для амплификации фрагментов, включающих последовательности всех экзонов, регионы сплайс-сайтов и промотерные области. Детектирование нуклеотидных последовательностей полученных ампликонов выполняли методом высокопроизводительного секвенирования (NGS). Наличие клинически значимых нарушений подтверждали методом автоматического секвенирования по Сенгеру. Крупные поломки определяли методом мультиплексной проба-зависимой лигазной реакции (MLPA) или флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). При выявлении нарушения у пробанда, выполняли генетическое исследование его кровным родственникам (5 семей). У 14 пациентов выявлено 13 различных генетических нарушения, 4 из которых ранее не были идентифицированы у пациентов с ретинобластомой среди других популяций (3 exon: c.350_351delTT, p.Phe117TyrfsTer2; 8 exon: c.861+2T>G; 24 exon: c.2520+4A>G; Del 16-17 exons). Все нарушения детектированы в гетерозиготном состоянии. Среди 13 уникальных нарушений: 38,5% (n=5) дефектов в сплайс-сайтах; 15,4% (n=2) миссенс; 15,4% (n=2) небольших делеций, приводящих к сдвигу рамки считывания; 23% (n=3) крупных делеций; 7,7% (n=1) нонсенс. Герминальные нарушения определены у 33,3% (3/9) пациентов с монолатеральной ретинобластомой и у 100% (11/11) с билатеральной. У 10% пациентов определён наследственный характер ретинобластомы. При исследовании 5 семей, у трёх пробандов выявленные нарушения определены как de novo. В этой статье представлены первые данные, полученные при генетическом исследовании белорусских пациентов с ретинобластомой. 78,6% нарушений детектированы методом секвенирования, тогда как 21,4% - методами MLPA и FISH, что демонстрирует необходимость применения комплексного подхода. Среди спорадических нарушений в 66,6% случаев (12/18) была затронута герминальная линия, что подчеркивает важность использования генетического тестирования при диагностике и клиническом мониторинге пациентов с ретинобластомой.

Ретинобластома – это агрессивное онкологическое заболевание глаза, происходящее из клеток-предшественников фоторецепторов сетчатки, наиболее часто дебютирующее в детском возрасте. У 98% пациентов ретинобластома инициируется биаллельной инактивацией гена RB1, играющего важную роль в регуляции клеточного цикла и поддержании стабильности генома. Около 40% нарушений в гене RB1 являются герминальными. Цель исследования – анализ частоты герминальных нарушений гена RB1 и их связи с клиническим фенотипом в группе белорусских пациентов с ретинобластомой. В исследование включено 20 пациентов из неродственных семей (9 пациентов с монолатеральной ретинобластомой, 11 – с билатеральной). У 2 из 11 пациентов с билатеральной ретинобластомой отмечен семейный анамнез заболевания. Геномную ДНК выделяли из суспензии лейкоцитов периферической крови. С полученной ДНК ставили серию ПЦР для амплификации фрагментов, включающих последовательности всех экзонов, регионы сплайс-сайтов и промотерные области. Детектирование нуклеотидных последовательностей полученных ампликонов выполняли методом высокопроизводительного секвенирования (NGS). Наличие клинически значимых нарушений подтверждали методом автоматического секвенирования по Сенгеру. Крупные поломки определяли методом мультиплексной проба-зависимой лигазной реакции (MLPA) или флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). При выявлении нарушения у пробанда, выполняли генетическое исследование его кровным родственникам (5 семей). У 14 пациентов выявлено 13 различных генетических нарушения, 4 из которых ранее не были идентифицированы у пациентов с ретинобластомой среди других популяций (3 exon: c.350_351delTT, p.Phe117TyrfsTer2; 8 exon: c.861+2T>G; 24 exon: c.2520+4A>G; Del 16-17 exons). Все нарушения детектированы в гетерозиготном состоянии. Среди 13 уникальных нарушений: 38,5% (n=5) дефектов в сплайс-сайтах; 15,4% (n=2) миссенс; 15,4% (n=2) небольших делеций, приводящих к сдвигу рамки считывания; 23% (n=3) крупных делеций; 7,7% (n=1) нонсенс. Герминальные нарушения определены у 33,3% (3/9) пациентов с монолатеральной ретинобластомой и у 100% (11/11) с билатеральной. У 10% пациентов определён наследственный характер ретинобластомы. При исследовании 5 семей, у трёх пробандов выявленные нарушения определены как de novo. В этой статье представлены первые данные, полученные при генетическом исследовании белорусских пациентов с ретинобластомой. 78,6% нарушений детектированы методом секвенирования, тогда как 21,4% - методами MLPA и FISH, что демонстрирует необходимость применения комплексного подхода. Среди спорадических нарушений в 66,6% случаев (12/18) была затронута герминальная линия, что подчеркивает важность использования генетического тестирования при диагностике и клиническом мониторинге пациентов с ретинобластомой.