Определение FLAER-негативных гранулоцитов в периферической крови -простой скрининг-тест для диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Статья в Elpub

Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2016; 15: 12-18

Определение FLAER-негативных гранулоцитов в периферической крови -простой скрининг-тест для диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Попов Александр Михайлович, Кашпор Светлана Александровна, Вержбицкая Татьяна Юрьевна, Борисов Вячеслав Игоревич, Фечина Лариса Геннадьевна, Плясунова Светлана Александровна, Масчан Алексей Александрович, Новичкова Галина Анатольевна

https://doi.org/10.24287/1726-1708-2016-15-3-12-18

Аннотация

Современным стандартом диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ) является определение ГФИ-дефицитных клеток многоцветной проточной цитометрией с использованием флуоресцентно-меченного аэролизина (FLAER). Однако в качестве скринингового теста при подозрении на ПНГ необходима разработка более простого теста, обладающего, тем не менее, высокой диагностической чувствительностью. Цель исследования - оценить возможность применения упрощенного двухцветного (FLAER/CD15) анализа в качестве скринингового исследования на наличие ПНГ-клона. FLAER-негативные гранулоциты определяли в 259 образцах периферической крови больных с подозрением на ПНГ. Результаты сравнивались с данными стандартного многоцветного исследования. Как в тестовой (n = 216), так и в валидационной (n = 43) когорте результаты определения FLAER-негативных гранулоцитов хорошо коррелировали с данными многоцветной цитометрии. При этом диагностическая чувствительность упрощенного метода в обеих когортах составила 100%, а количество ложноположительных результатов было крайне низким (2,3% в тестовой когорте и 0% в валидационной). Таким образом, двухцветное цитометрическое определение FLAER-негативных гранулоцитов является высокоэффективным скрининговым тестом на наличие ПНГ-клона. При этом положительный результат должен быть подтвержден дальнейшим комплексным иммунофенотипированием с определением размера ГФИ-дефицитной популяции среди эритроцитов, гранулоцитов и моноцитов.

Список литературы

1. Parker CJ. The pathophysiology of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Exp Hemtol. 2007;35(4):523-33.

2. Richards SJ, Hill A, Hillmen P. Recent advances in the diagnosis, monitoring, and management of patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72(5):291-8.

3. Кулагин АД, Лисуков ИА, Птушкин ВВ, Шилова ЕР, Цветаева НВ, Михайлова ЕА. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Онкогематология. 2014;2:20-8.

4. Новичкова ГА, Петрова УН, Калинина ИИ, Масчан АА. Пароксизмальная ночная гемоглобинурия у детей (обзор литературы). Доктор.ру. 2016; 5(122):15-20.

5. Brodsky RA, Mukhina GL, Li S, Nelson KL, Chiurazzi PL, Buckley JT, et al. Improved detection and characterization of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria using fluorescent aerolysin. Am J Clin Pathol. 2000;114(3):459-66.

6. Peghini PE, Fehr J. Clinical evaluation of an aerolysin-based screening test for paroxysmal nocturnal haemoglobinuria. Cytometry B Clin Cytom. 2005; 67(1):13-8.

7. Sutherland DR, Kuek N, Davidson J, Barth D, Chang H, Yeo E, et al. Diagnosing PNH with FLAER and multiparameter flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72(3):167-77.

8. Sutherland DR, Kuek N, Azcona-Olivera J, Anderson T, Acton E, Barth D, et al. Use of a FLAER-based WBC assay in the primary screening of PNH clones. Am J Clin Pathol. 2009;132(4):564-72.

9. Borowitz MJ, Craig FE, Digiuseppe JA, Illingworth AJ, Rosse W, Sutherland DR, et al. Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. 2010;78(4):211-30.

10. Sutherland DR, Illingworth A, Keeney M, Richards SJ. High-Sensitivity Detection of PNH Red Blood Cells, Red Cell Precursors, and White Blood Cells. Curr Protoc Cytom. 2015;72(6):1-29.

11. Плеханова ОС, Наумова ЕВ, Луговская СА, Почтарь МЕ, Бугров ИЮ, Долгов ВВ. Методологические подходы к диагностике пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Клиническая лабораторная диагностика. 2016;61(3):151-68.

12. Sutherland DR, Acton E, Keeney M, Davis BH, Illingworth A. Use of CD157 in FLAER-based assays for high-sensitivity PNH granulocyte and PNH monocyte detection. Cytometry B Clin Cytom. 2014;86(1):44-55.

13. Гальцева ИВ, Фидарова ЗТ, Борисов ВИ, Михайлова ЕА. Новые возможности диагностики клона пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Гематология и трансфузиология. 2015;60(2):6-9.

14. Hochsmann B, Rojewski M, Schrezenmeier H. Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH): higher sensitivity and validity in diagnosis and serial monitoring by flow cytometric analysis of reticulocytes. Ann Hematol. 2011;90(8): 887-99.

15. Наумова ЕВ, Плеханова ОС, Луговская СА, Почтарь МЕ, Бугров ИЮ. Оценка и сравнительная характеристика определения ПНГ-клона на ретикулоцитах методом проточной цитометрии. Клиническая лабораторная диагностика. 2014;59(7):25-40.

16. Наумова ЕВ, Почтарь МЕ, Кисиличина ДГ, Плеханова ОС, Сипол АА, Бабенко ЕВ и др. Стандартизация диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии с помощью проточной цитометрии. Клиническая лабораторная диагностика. 2013;61(7):54-8.

17. Sipol AA, Babenko EV, Borisov VI, Naumova EV, Boyakova EV, Yakunin DI, et al. An inter-laboratory comparison of PNH clone detection by high-sensitivity flow cytometry in a Russian cohort. Hematology. 2015;20(1):31-8.

18. Weinstein S, Obuchowski NA, Lieber ML. Clinical evaluation of diagnostic tests. Am J Roentgenol. 2005;184(1):14-9.

Pediatric Hematology/Oncology and Immunopathology. 2016; 15: 12-18

FLAER-negative granulocytes detection in periferal blood is simple and highly reproducible test for pnh screening

Popov Alexander M., Kashpor Svetlana A., Verzhbitskaya Tatiana Yu., Borisov Vyacheslav V., Fechina Larisa G., Plyasunova Svetlana A., Maschan Alexey A., Novichkova Galina A.

https://doi.org/10.24287/1726-1708-2016-15-3-12-18

Abstract

GPI-deficient cells' detection by multicolor flow cytometry using fluorescently labeled aerolysin (FLAER) currently is a standard approach for PNH diagnostics. Nevertheless more simple and cheap approach with high sensitivity is needed for routine PNH screening. The aim of present study was to investigate the applicability of simplified two-color (FLAER/CD15) flow cytometry for PNH clone screening. Search for FLAER-negative granulocytes was performed in 259 peripheral blood samples obtained from the patients with suspected PNH. Symplified analysis results were compared to the multicolor data. Both in test cohort (n = 216) and validation cohort (n = 43) FLAER-negative granulocytes detection results correlated well with conventional cytometric test findings. Simplified approach diagnostic sensitivity achieved 100% while rate of false positive results was very low (2.63% in test cohort and 0% in validation cohort). Thus two-color detection of FLAER-negative I granulocytes is effective test as a screening for presence of PNH clone. Nevertheless the positive result of screening investigation should be always confirmed by multicolor assessment of PNH clone size among erythrocytes, granulocytes and monocytes.

References

1. Parker CJ. The pathophysiology of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Exp Hemtol. 2007;35(4):523-33.

2. Richards SJ, Hill A, Hillmen P. Recent advances in the diagnosis, monitoring, and management of patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72(5):291-8.

3. Kulagin AD, Lisukov IA, Ptushkin VV, Shilova ER, Tsvetaeva NV, Mikhailova EA. Natsional'nye klinicheskie rekomendatsii po diagnostike i lecheniyu paroksizmal'noi nochnoi gemoglobinurii. Onkogematologiya. 2014;2:20-8.

4. Novichkova GA, Petrova UN, Kalinina II, Maschan AA. Paroksizmal'naya nochnaya gemoglobinuriya u detei (obzor literatury). Doktor.ru. 2016; 5(122):15-20.

6. Peghini PE, Fehr J. Clinical evaluation of an aerolysin-based screening test for paroxysmal nocturnal haemoglobinuria. Cytometry B Clin Cytom. 2005; 67(1):13-8.

7. Sutherland DR, Kuek N, Davidson J, Barth D, Chang H, Yeo E, et al. Diagnosing PNH with FLAER and multiparameter flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72(3):167-77.

8. Sutherland DR, Kuek N, Azcona-Olivera J, Anderson T, Acton E, Barth D, et al. Use of a FLAER-based WBC assay in the primary screening of PNH clones. Am J Clin Pathol. 2009;132(4):564-72.

10. Sutherland DR, Illingworth A, Keeney M, Richards SJ. High-Sensitivity Detection of PNH Red Blood Cells, Red Cell Precursors, and White Blood Cells. Curr Protoc Cytom. 2015;72(6):1-29.

11. Plekhanova OS, Naumova EV, Lugovskaya SA, Pochtar' ME, Bugrov IYu, Dolgov VV. Metodologicheskie podkhody k diagnostike paroksizmal'noi nochnoi gemoglobinurii. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2016;61(3):151-68.

13. Gal'tseva IV, Fidarova ZT, Borisov VI, Mikhailova EA. Novye vozmozhnosti diagnostiki klona paroksizmal'noi nochnoi gemoglobinurii. Gematologiya i transfuziologiya. 2015;60(2):6-9.

15. Naumova EV, Plekhanova OS, Lugovskaya SA, Pochtar' ME, Bugrov IYu. Otsenka i sravnitel'naya kharakteristika opredeleniya PNG-klona na retikulotsitakh metodom protochnoi tsitometrii. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2014;59(7):25-40.

16. Naumova EV, Pochtar' ME, Kisilichina DG, Plekhanova OS, Sipol AA, Babenko EV i dr. Standartizatsiya diagnostiki paroksizmal'noi nochnoi gemoglobinurii s pomoshch'yu protochnoi tsitometrii. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2013;61(7):54-8.

18. Weinstein S, Obuchowski NA, Lieber ML. Clinical evaluation of diagnostic tests. Am J Roentgenol. 2005;184(1):14-9.