Первый опыт оценки функциональной активности тромбоцитов у больных с синдромом Казабаха-Мерритт

Статья в Elpub

Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2016; 15: 21-27

Первый опыт оценки функциональной активности тромбоцитов у больных с синдромом Казабаха-Мерритт

Глуханюк Евгений Владимирович, Дёмина Ирина Андреевна, Игнатова Анастасия Александровна, Орехова Екатерина Владимировна, Хачатрян Лили Альбертовна, Пантелеев Михаил Александрович

https://doi.org/10.24287/1726-1708-2016-15-4-21-27

Аннотация

Синдром Казабаха-Меритт - редкое жизнеугрожающее состояние, характеризующееся наличием сосудистой опухоли и связанных с ней тромбоцитопении и коагулопатии потребления вследствие активного локального разрушения в ней тромбоцитов. Несмотря на успехи в изучении биологии опухолей, ассоциированных с данным синдромом, не существует работ по целенаправленному изучению состояния тромбоцитов у таких больных. Гипотетическая склонность тромбоцитов к разрушению в зоне опухоли может явиться дополнительным фактором патогенеза, с одной стороны, а с другой - представлять собой потенциальное поле для терапевтических опций. Цель. Оценка функционального состояния тромбоцитов у трех пациентов с синдромом Казабаха-Меритт. Материалы и методы. В исследовании участвовали трое пациентов в возрасте 4-7 мес. на разных этапах терапии (курс химиотерапии (циклофосфан и винбластин), принимали ß-адреноблокатор пропранолол, гепарин, при необходимости преднизолон), с разной степенью тромбоцитопении и тяжестью состояния. Забор цельной крови осуществлялся ежемесячно трехкратно в вакуумные пробирки с цитратом. Автоматическим способом производился подсчет числа тромбоцитов. После разведения образцов в отдельных емкостях производилась загрузка тромбоцитов мепакрином (плотные гранулы), мечение антителами к CD61 (общее колическтво интегрина ß₃), PAC1 (активированный интегрин IlblIIa), CD42b (гликопротеин GP-1b), CD62P (компонент а-гранул P-селектин), аннексином V (фосфатидилсерин, так называемые «прокоагулянтные» тромбоциты). Часть тромбоцитов активировалась смесью коллагенподобного пептида (активатор коллагенового рецептора GPVI) и пептида SFLLRN (активатор тромбинового рецептора PAR1). Далее производился анализ на проточном цитометре. Результаты. Для всех пациентов характерен феномен предактивации интегрина IIbIIIa и повышенное содержание активированных прокоагулянтных тромбоцитов в покоящемся состоянии, при этом тромбоциты не утрачивают способности дополнительно активироваться при стимуляции. Для части пациентов характерна повышенная экспрессия гликопротеина 1 на покоящихся тромбоцитах и незначительная рефрактерность при высвобождении а-гранул при стимуляции. Для всех пациентов характерна нормальная экспрессия интегрина ß-З как на покоящихся, так и на активированных тромбоцитах. Выводы. Впервые произведен анализ функциональной активности тромбоцитов, указывающий на то, что при данной патологии тромбоциты не являются интактными. Наиболее значимой находкой явился феномен предактивации покоящихся тромбоцитов, причем по двум направлениям: повышена доля как «проагрегантных», так и «прокоагулянтных» тромбоцитов. При этом, несмотря на состояние предактивированности, тромбоциты не утрачивают способности дополнительно активироваться при стимуляции. Обнаруженные изменения могут носить как первичный, так и вторичный характер и требуют дополнительного исследования.

Список литературы

1. O'Rafferty C, O'Regan GM, Irvine AD, Smith OP. Recent advances in the pathobiology and management of Kasabach-Merritt phenomenon. Br J Haematol. 2015 Oct;171(1):38-51. doi: 10.1111/bjh.13557. Epub 2015 Jun 30.

2. Fernandez AP, Wolfson A, Ahn E, Maldonad JC, Alonso-Llamazares J. Kasabach-Merritt phenomenon in an adult man with a tufted angioma and cirrhosis responding to radiation, bevacizumab, and prednisone. Int J Dermatol. 2014 Sep;53(9):1165-76. doi: 10.1111/ijd.12319. Epub 2014 Apr 2.

3. Debelenko LV, Perez-Atayde AR, Mulliken JB, Liang MG, Archibald TH, Kozakewich HP. D2-40 immunohistochemical analysis of pediatric vascular tumors reveals positivity in kaposiform hemangioendothelioma. Mod Pathol. 2005 Nov; 18(11):1454-60.

4. Annigeri VM, Pai V, Dasar S. Kaposiform hemangioendothelioma with Kasabach-Merritt syndrome in a newborn. Eur J Pediatr Dermatology. 2012;22:249-52.

5. Uhrin P, Zaujec J, Breuss JM, Olcaydu D, Chrenek P, Stockinger H, et al. Novel function for blood platelets and podoplanin in developmental separation of blood and lymphatic circulation. Blood. 2010 May 13;115(19):3997-4005. doi: 10.1182/ blood-2009-04-216069. Epub 2010 Jan 28.

6. Saito M, Gunji Y, Kashii Y, Odaka J, Yamauchi T, Kanai N, et al. Refractory kaposiform hemangioendothelioma that expressed vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR)-2 and VEGFR-3: a case report. J Pediatr Hematol Oncol. 2009 Mar;31(3):194-7. doi: 10.1097/MPH.0b013e3181979c83.

7. Battinelli EM, Markens BA, Italiano JE. Release of angiogenesis regulatory proteins from platelet alpha granules: Modulation of physiologic and pathologic angiogenesis. Blood. 2011;118:1359-69.

8. Дёмина ИА, Жарков ПА, Пантелеев МА. Использование метода исследования функциональной активности тромбоцитов у детей с геморрагическим синдромом. Гематология. Трансфузиология. Восточная Европа. 2015;1:157-64.

9. Кумскова МА, Дёмина ИА, Подоплелова НА, Баландина АН, Серёгина ЕА, Бондар ЕВ и др. Диагностика тромбастении Гланцмана с помощью исследования показателей плазменного и тромбоцитарного звеньев гемостаза. Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2015;14(4):17-24.

10. Lopez V, Marti N, Pereda C, Martin JM, Ramön D, Mayordomo E, et al. Successful management of Kaposiform hemangioendothelioma with Kasabach-Merritt phenomenon using vincristine and ticlopidine. Pediatr Dermatol. 2009 May-Jun;26(3):365-6. doi: 10.1111/j.1525-1470.2009.00923.x.

Pediatric Hematology/Oncology and Immunopathology. 2016; 15: 21-27

A first experience of assessing the functional activity of platelets in patients with Kasabach-Merritt syndrome

Glukhanyuk Evgeniy V., Demina Irina A., Ignatova Anastasiya A., Orekhova Ekaterina V., Khachatryan Lili A., Panteleev Mikhail A.

https://doi.org/10.24287/1726-1708-2016-15-4-21-27

Abstract

Kasabach-Merritt syndrome is a rare life-threatening condition characterised by a vascular tumour and associated consumptive thrombocytopenia and coagulopathy due to active local destruction of platelets. Despite successful research on the biology of tumours associated with this syndrome there are no targeted works studying the state of platelets in such patients. A hypothetic liability of platelets to destruction in the tumour area might be an additional factor of pathogenesis, on the one hand, and on the other, it might be a potential field for therapeutic options. The objective of the work is to assess the functional state of platelets in three patients with Kasabach-Merritt syndrome. Materials and methods. The study included three patients aged 4-7 months at different stages of therapy (chemotherapy course (cyclophosphan and vinblastin), received ß-adrenergic blocker propranolol, heparin, if necessary prednisolone), with different severity of thrombocytopenia and health in general. Whole blood was taken three times monthly to vacuum tubes with citrate. The platelet counts were automated. After samples were diluted in separate vessels platelets were loaded with mepacrine (dense granules), labelled with antibodies to CD61 (total ß3 integrin), PAC1 (activated integrin IIbIIIa), CD42b (glycoprotein GP-1b), CD62P (а-granule P-selectin component), annexin V (phosphatidylserin, so-called «procoagulant» platelets). A part of platelets was activated by mixed collagen-like peptide (collagen receptor activator GPVI) and peptide SFLLRN (thrombin receptor activator PAR1). Then testing was performed by flow cytometry. Results. All patients had a characteristic phenomenon of integrin IIbIIIa preactivation and higher levels of activated procoagulant platelets in a resting state, platelet not losing the ability to get additionally activated at stimulation. Some patients had a characteristic enhanced expression of glycoprotein 1 on resting platelets and insignificant refractoriness in а-гранул release at stimulation. Normal expression of integrin ß-3 on both resting and activated platelets was characteristic for all patients. Conclusions. For the first time, analysis of platelet functional activity was performed which indicated that in this pathology platelets are not intact. The most significant finding was the phenomenon of preactivation of resting platelets along two lines: higher percentage of both «proaggregant», and «procoagulant» platelets. Despite the preactivation state, platelets do not lose the ability to get additionally activated at stimulation. The found changes might be of both primary and secondary character and need further investigation.

References

4. Annigeri VM, Pai V, Dasar S. Kaposiform hemangioendothelioma with Kasabach-Merritt syndrome in a newborn. Eur J Pediatr Dermatology. 2012;22:249-52.

7. Battinelli EM, Markens BA, Italiano JE. Release of angiogenesis regulatory proteins from platelet alpha granules: Modulation of physiologic and pathologic angiogenesis. Blood. 2011;118:1359-69.

8. Demina IA, Zharkov PA, Panteleev MA. Ispol'zovanie metoda issledovaniya funktsional'noi aktivnosti trombotsitov u detei s gemorragicheskim sindromom. Gematologiya. Transfuziologiya. Vostochnaya Evropa. 2015;1:157-64.

9. Kumskova MA, Demina IA, Podoplelova NA, Balandina AN, Seregina EA, Bondar EV i dr. Diagnostika trombastenii Glantsmana s pomoshch'yu issledovaniya pokazatelei plazmennogo i trombotsitarnogo zven'ev gemostaza. Voprosy gematologii/onkologii i immunopatologii v pediatrii. 2015;14(4):17-24.