Mоделирование подкожного ксенографта меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF на иммунодефицитных мышах для доклинического изучения таргетных противоопухолевых средств

Статья в Elpub

Российский биотерапевтический журнал. 2016; 15: 65-71

Mоделирование подкожного ксенографта меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF на иммунодефицитных мышах для доклинического изучения таргетных противоопухолевых средств

Андронова Н. В., Морозова Л. Ф., Михайлова И. Н., Лушникова А. А., Понкратова Д. А., Райхлин Н. Т., Букаева И. А., Борисова Ю. А., Ситдикова Сурия Мансуровна, Трещалина Е. М.

https://doi.org/10.17650/1726-9784-2016-15-4-65-71

Аннотация

Введение. Разработка новых моделей диссеминированной меланомы кожи человека с молекулярно-генетической мишенью для таргетной терапии повышает результативность доклинических исследований in vitro и in vivo новых антимеланомных средств и их комбинаций. Такая возможность реализована путем адаптации к росту in vivo оригинальной линии клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher и получения подкожного (п/к) ксенографта под контролем трансплантационных, морфологических, молекулярно-генетических (мутация V600E BRAF) и химиотерапевтических (чувствительность к ингибитору BRAF-киназ вемурафенибу) характеристик. Цель исследования - получение из линии клеток mel Cher п/к ксенографта пигментированной меланомы кожи человека с мутацией V600E BRAF, чувствительной к специфической таргетной терапии. Материалы и методы. Использованы линия клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher из коллекции ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава России (РОНЦ) и иммунодефицитные мыши-самки Balb/c nude разведения РОНЦ. Искомые характеристики определены при многократном п/к трансплантировании in vivo с помощью методов трансплантационной биологии, световой микроскопии, молекулярной генетики и экспериментальной химиотерапии. Чувствительность к ингибитору BRAF-киназы вемурафенибу оценена под контролем скорости роста опухоли (V/Vq) по адекватным для пациентов показателям: наличие полной ремиссии и возможность рецидива. Результаты. При п/к трансплантации 10⁷ клеток линии mel Cher получены цитологически идентичные перевиваемые п/к ксенографты с устойчивой кинетикой роста на 4-9-м пассажах (латентная фаза 8 дней, экспоненциальная - до 14, стационарная - до 24) и наличием мутации V600E BRAF. Вемурафениб в разовой дозе 75 мг/кг вызвал полную ремиссию в течение 15-дневного курса и в течение 7 дней после его отмены, с последующим рецидивом. Заключение. Полученный из линии клеток пигментированной меланомы кожи человека mel Cher чувствительный к вемурафенибу п/к ксенографт с мутацией V600E BRAF пригоден для доклинического изучения направленных на эту мишень новых противомеланомных средств.

Список литературы

1. Вишневская Я.В., Машенкина Я.А., Сендерович А.И. и др. Озвременная морфологическая, иммуногистохимическая и молекулярно-генетическая диагностика меланомы кожи. Сибирский онкологический журнал 2012;4(52): 74-5.

2. Демидов Л.В., Орлова К.В. Индивидуализация лекарственного лечения меланомы кожи. Практическая онкология 2013;14(4):239-46.

3. Bollag G., Hirth P., Tsai J. et al. Clinical efficacy of a RAF inhibitor needs broad target blockade in BRAF-mutant melanoma. Nature 2010;467:596-9.

4. Flaherty K.T., Puzanov I., Kim K.B. et al. Inhibition of mutated, activated BRAF in metastatic melanoma. N Engl J Med 2010;363:809-19.

5. Joseph E.W., Pratilas C.A., Poulikakos P.I. et al. The RAF inhibitor PLX4032 inhibits ERK signaling and tumor cell proliferation in a V600E BRAF-selective manner. Proc Natl Acad Sci U S A 2010;107(33):14903-8.

6. Tsai J., Lee J.T., Wang W. et al. Discovery of a selective inhibitor of oncogenic B-Raf kinase with potent antimelanoma activity. Proc Natl Acad Sci USA 2008; 105:3041-6.

7. Benlloch S., Paya A., Alenda C. et al. Detection of BRAF V600E mutation in colorectal cancer comparison of automatic sequencing and real-time chemistry methodology. J Mol Diagn 2006;8:540-3.

8. Ribas A., Kim K.B., Schuchter L.M. et al. BRIM-2: an open label, multicenter phase II study of vemurafenib in previously treated patients with BRAF V600E mutation positive melanoma. J Clin Oncol 2011; 29(15 Suppl):8509.

9. Walker G.J., Soyer H.P., Terzian T., Box N.F. Modelling melanoma in mice. Pigment Cell Melanoma Res 2011;24:1158-76.

10. Михайлова И.М., Барышников А.Ю. Коллекция клеточных линий меланомы человека. Издательство НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России 2016:107.

11. Патент РФ № 2364624. Клеточная линия меланомы человека mel Cher, используемая для получения противоопухолевых вакцин. Михайлова И.Н., Барышников А.Ю., Демидов Л.В., Киселев С.Л., Бурова О.С., Морозова Л.Ф. 2009.

12. Трещалина Е.М. Иммунодефицитные мыши разведения РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Возможности использования. М., 2010.

13. Патент РФ № 2572569. Способ получения подкожных ксенографтов клеточной линии меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF для доклинического изучения таргетных противоопухолевых средств. 2015.

14. Трещалина Е.М., Андронова Н.В., Гарин А.М. Доклиническое изучение противоопухолевых препаратов. В кн.: Рациональная фармакотерапия в онко логии. М.: Litterra, 2015. С. 75-82.

Russian Journal of Biotherapy. 2016; 15: 65-71

MODELING OF A SUBCUTANEOUS XENOGRAFT OF HUMAN SKIN MELANOMA MEL CHER WITH V600E BRAF MUTATION IN IMMUNODEFICIENT MICE FOR PRECLINICAL STUDY THE TARGETING ANTICANCER DRUGS

Andronova N. V., Morozova L. F., Mikhailova I. N., Lushnikova A. A., Ponkratova D. A., Raychlin N. T., Bukaeva I. A., Borisova U. A., Sitdikova S. M., Treshalina H. M.

https://doi.org/10.17650/1726-9784-2016-15-4-65-71

Abstract

Introduction. Development of new models of a human disseminated skin melanoma of the with molecular-genetic targets for specific therapy increases productivity of the preclinical researches new the anti-melanoma drugs or their combinations in vitro and in vivo. Such opportunity is realized by adaptation in vivo of the original human pigmented skin melanoma cell line mel Cher and receiving subcutaneous (s. c.) xenograft under monitoring of transplant, morphological, molecular-genetic (V600E BRAF mutation) and chemotherapeutic (sensitivity for the inhibitor of BRAF kinases to a vemurafenib) characteristics. Objective: receiving from the cell line mel Cher s. c. xenogratft of the human pigmented skin melanoma with V600E BRAF mutation and sensitive to specific target therapy. Materials and methods. Human pigmented skin melanoma cell line mel Cher from the Collection of Russian Cancer Research Center and immunodeficient Balb/c nude female mice cultivated in Russian Cancer Research Center was used. Required characteristics are defined by multiple s. c. transplanting in vivo by methods of transplant biology, a light microscopy, molecular-genetics and the experimental chemotherapy. Sensitivity to a BRAF kinase inhibitor to a vemurafenib was estimated under monitoring of the tumor growth rate (Vt/V0) on indexes, adequate for patients: existence of the complete remission and possibility of recurrence. Results. When s. c. transplantation of 107 cell of mel Cher line cytological identical intertwined s. c. xenografts with a stable growth kinetics on 4-9 passages (a latent phase 8 days, exponential - to 14 days, stationary - to 24 days) and existence of a mutation of V600E BRAF have been recieved. Vemurafenib in a single dose of 75 mg/kg caused the complete remission during a 15-day course and within 7 days after its cancellation - with the subsequent recurrence. Conclusion: receiving from the cell line mel Cher s. c. xenogratft of a human pigmented melanoma of skin with a mutation of V600E BRAF and sensitive to specific target therapy is suitable for preclinical studying of the new anti-melanoma drugs specific for this target.

References

1. Vishnevskaya Ya.V., Mashenkina Ya.A., Senderovich A.I. i dr. Ozvremennaya morfologicheskaya, immunogistokhimicheskaya i molekulyarno-geneticheskaya diagnostika melanomy kozhi. Sibirskii onkologicheskii zhurnal 2012;4(52): 74-5.

2. Demidov L.V., Orlova K.V. Individualizatsiya lekarstvennogo lecheniya melanomy kozhi. Prakticheskaya onkologiya 2013;14(4):239-46.

3. Bollag G., Hirth P., Tsai J. et al. Clinical efficacy of a RAF inhibitor needs broad target blockade in BRAF-mutant melanoma. Nature 2010;467:596-9.

4. Flaherty K.T., Puzanov I., Kim K.B. et al. Inhibition of mutated, activated BRAF in metastatic melanoma. N Engl J Med 2010;363:809-19.

6. Tsai J., Lee J.T., Wang W. et al. Discovery of a selective inhibitor of oncogenic B-Raf kinase with potent antimelanoma activity. Proc Natl Acad Sci USA 2008; 105:3041-6.

7. Benlloch S., Paya A., Alenda C. et al. Detection of BRAF V600E mutation in colorectal cancer comparison of automatic sequencing and real-time chemistry methodology. J Mol Diagn 2006;8:540-3.

9. Walker G.J., Soyer H.P., Terzian T., Box N.F. Modelling melanoma in mice. Pigment Cell Melanoma Res 2011;24:1158-76.

10. Mikhailova I.M., Baryshnikov A.Yu. Kollektsiya kletochnykh linii melanomy cheloveka. Izdatel'stvo NII EDiTO FGBU «RONTs im. N.N. Blokhina» Minzdrava Rossii 2016:107.

11. Patent RF № 2364624. Kletochnaya liniya melanomy cheloveka mel Cher, ispol'zuemaya dlya polucheniya protivoopukholevykh vaktsin. Mikhailova I.N., Baryshnikov A.Yu., Demidov L.V., Kiselev S.L., Burova O.S., Morozova L.F. 2009.

12. Treshchalina E.M. Immunodefitsitnye myshi razvedeniya RONTs im. N.N. Blokhina RAMN. Vozmozhnosti ispol'zovaniya. M., 2010.

13. Patent RF № 2572569. Sposob polucheniya podkozhnykh ksenograftov kletochnoi linii melanomy kozhi cheloveka mel Cher s mutatsiei V600E BRAF dlya doklinicheskogo izucheniya targetnykh protivoopukholevykh sredstv. 2015.

14. Treshchalina E.M., Andronova N.V., Garin A.M. Doklinicheskoe izuchenie protivoopukholevykh preparatov. V kn.: Ratsional'naya farmakoterapiya v onko logii. M.: Litterra, 2015. S. 75-82.

Аннотация

MODELING OF A SUBCUTANEOUS XENOGRAFT OF HUMAN SKIN MELANOMA MEL CHER WITH V600E BRAF MUTATION IN IMMUNODEFICIENT MICE FOR PRECLINICAL STUDY THE TARGETING ANTICANCER DRUGS

Abstract

События

EasyCookieInfo