Введение. Нарушение функционирования BRCA1 приводит к развитию ряда онкологических заболеваний, включая рак молочной железы (РМЖ), рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, рак желудка, рак поджелудочной железы. Недавно продемонстрирована прогностическая и предиктивная значимость BRCA1, белка репарации ДНК ERCC1 в плане характера течения заболевания и чувствительности/резистентности к химиотерапии, но заключения неоднозначны. Цель исследования - уточнение возможной прогностической значимости экспрессии в опухоли BRCA1 путем проведения строго количественной оценки уровня маркера в ткани РМЖ у пациентов c благоприятным и неблагоприятным прогнозом в соответствии со статусом рецепторов эстрогенов (РЭ) в опухолях, различающихся по чувствительности к препаратам платины. Материалы и методы. Оценка экспрессии BRCA1 проведена в 50 хирургических образцах РМЖ (40 - с положительным статусом РЭ и 10 - с отрицательным) с использованием количественного иммунофлуоресцентного метода, сопряженного с проточной цитофлуориметрией. Суспензии клеток опухоли инкубировали с первичными антителами к BRCA1 (SD118, Calbiochem) и со вторичными флуоресцентными антителами (DyLight650, ab98729, Abcam). Измерение флуоресценции проводили на проточном цитофлуориметре FACSCanto II (Becton Dickinson, США) с применением программного обеспечения FACSDiva 6.0. Показатели экспрессии BRCA1 анализировали с помощью программы FlowJo 10.0 с использованием статистического метода Колмогорова - Смирнова. Уровень экспрессии BRCA1 определяли как количество специфически флуоресцирующих клеток относительно общего количества исследованных. Результаты. Экспрессия BRCA1 идентифицирована во всех исследованных образцах ткани РМЖ со средним значением уровня экспрессии 36,8 ± 7,6 % и медианой 37 %. При расчете t-критерия Стьюдента отмечено статистически значимое различие средних значений уровня экспрессии BRCA1 (р = 0,02) в группах больных с положительным и больных с отрицательным статусом РЭ (38,0 ± 7,5 и 32,0 ± 6,3 % соответственно). Сравнение уровня экспрессии BRCA1 с использованием теста Манна - Уитни также выявило статистически значимое различие (р = 0,016). Различия в средних значениях уровня экспрессии BRCA1 оказались особенно выраженными (р = 0,007) при сравнении групп пациентов с положительным и с отрицательным статусом РЭ со значениями экспрессии BRCA1 меньше медианы (32,4 ± 5,0 и 26,8 ± 2,9 % соответственно). При сравнении показателей экспрессии BRCA1 в опухолях с негативным статусом РЭ и медианы уровня экспрессии BRCA1 по всей группе исследованных опухолей (37 %) выявлена корреляция сниженного уровня экспрессии BRCA1 с отрицательным статусом РЭ в опухоли. Значения уровня экспрессии белка BRCA1 ниже медианы выявлены у 80 % пациентов с отрицательным статусом РЭ в опухоли, выше медианы - в 20 % случаев соответственно. Выводы. Результаты исследований показали, что белок BRCA1 экспрессируется на различном уровне в опухолевой ткани у всех пациентов с РМЖ. Пониженный уровень экспрессии BRCA1 выявляется чаще в РЭ-негативных по сравнению с РЭ-позитивными опухолями, а отсутствие РЭ в ткани РМЖ является неблагоприятным фактором прогноза, соответственно пониженный уровень экспрессии BRCA1 имеет неблагоприятное прогностическое значение.

Introduction. The disruption of BRCA1 function leads to the development of several cancers including breast cancer, ovarian cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, pancreatic cancer. Recently it was demonstrated that BRCA1 protein as well as another DNA repair protein, ERCC1, could be prognostic markers of the course of the disease and predictive markers of platinum-based chemotherapy efficiency. Nevertheless, the obtained data are controversial. Aim. In current study the comparison of BRCA1 expression in breast cancer with favorable and unfavorable prognosis based on estrogen receptor status (ER+ and ER^- ) was carried out to evaluate its potential prognostic significance for subsets of breast cancer with different platinum chemotherapy sensitivity. Materials and methods. The estimation of BRCA1 expression was made in 50 samples of breast cancer tissue (40 ER+ and 10 ER^-) using the quantitative immunofluorescent method coupled with flow cytometry. Tumor cell suspensions were incubated with primary anti-BRCA1 antibodies (Abs) (SD118, Calbiochem) and secondary fluorescent Abs (DyLight650, ab98729). Cell fluorescence was measured at the Flow Cytometer FACSCanto II (Becton Dickinson, USA) using the program FACSDiva 6.0. The level of BRCA1 expression was analyzed using the program FlowJo 10.0 with statistical approach of Kolmogorov-Smirnov. The level of BRCA1 expression was determined as the ratio of specifically fluorescent cells to the total number of cells. Results. 1. The expression of BRCA1 was revealed in all breast cancer samples with mean expression level 36.8 ± 7.6 % and median 37 %. 2. Using the method of Student t-test statistically significant difference in mean value of BRCA1 expression level (p = 0.02) was revealed between ER+ and ER^- breast cancer groups (38.0 ± 7.5 % and 32.0 ± 6.3 %, respectively) 3. Comparison of BRCA1 expression level in ER+ and ER^- breast cancer groups using Mann - Whitney test also demonstrated statistically significant difference (p = 0.016). 4. These differences in mean value of BRCA1 expression level were especially prominent (p = 0.007) upon the comparison of ER+ and ER- breast cancer groups with BRCA1 expression levels below median (32.4 ± 5.0 % and 26.8 ± 2.9 %, respectively). 5. Comparison of BRCA1 expression levels in ER- breast tumors and the median for all studied breast cancer samples (37 %) demonstrated the correlation of decreased level of BRCA1 expression and negative ER status of the tumor. BRCA1 expression levels below the median were shown for 80 % of breast cancer patients with negative ER status in tumor, and over the median - in 2 0 % of cases, respectively. Conclusion. The results of current studies demonstrated that BRCA1 protein is expressed at different levels in the tumor tissue of all breast cancer patients. Lower level of BRCA1 expression in ER-negative as compared to ER-positive tumors, and established unfavorable prognostic value of ER-negative breast cancer status point to poor prognostic value of lower level of BRCA1 expression.