ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОЛИГОСАХАРИДОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ МОДИФИКАЦИИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

Главная

Статья в Elpub

РУС ENG

Российский биотерапевтический журнал. 2016; 15: 44-48

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОЛИГОСАХАРИДОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ МОДИФИКАЦИИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

Гриневич Анатолий Станиславович, Краева М. Н., Бурова О. С., Иванов П. К.

https://doi.org/10.17650/1726-9784-2016-15-4-44-48

Аннотация

Введение. Моноклональные антитела (МКАТ) служат надежным и удобным инструментом диагностики патологий человека. Чаще всего они используются в качестве конъюгатов с флуоресцентными и иными метками. Классический подход создания таких конъюгатов сводится к химическим реакциям с использованием белковой основы моноклональных антител. Вместе с тем для целого ряда МКАТ изготовление конъюгата сопровождается встраиванием метки в антигенсвязывающий участок, что приводит к уменьшению или полной потере специфической активности конъюгата. Выходом из данной ситуации может стать синтез флуоресцентных конъюгатов методами углеводной химии через пространственно удаленные от активного центра олигосахариды антител. Цель исследования - показать принципиальную возможность химической модификации олигосахаридов МКАТ серии ICO и получить на их базе флуоресцентные конъюгаты. Материалы и методы. В работе использовалась панель МКАТ серии ICO высокой степени очистки. Олигосахариды МКАТ, окисляясь до альдегидных групп, подвергались взаимодействию с гидразиновым производным биотина и конъюгировались со стрептавидин-флуоресцеином. Полученный комплекс был использован для прямой реакции иммунофлуоресценции. Результаты. Все модифицированные МКАТ сохраняли специфичность связывания с клетками-мишенями, присущую нативным антителам. Заключение. Данный метод может быть альтернативой для конъюгирования флуоресцентных меток с МКАТ, для которых методы белкового синтеза приводят к потере активности конъюгата.

Список литературы

1. Buchowicz I., Zakrzewski K. Carbohydrate oxidation and antibody function in equine anti-diphtheria immunoglobulin T. Immunochemistry 1975;12:795-800. PMID: 173648.

2. Hage D.S., Wolfe C.A., Oates M.R. Development of a Kinetic Model To Describe the Effective Rate of Antibody Oxidation by Periodate. Bioconjugate Chem 1997;8(6):914-20. DOI: 10.1021/bc970112o. PMID: 9404666.

3. Hermanson G.T. Bioconjugate techniques. Amsterdam: Elsevier Academic Press, 2013.

4. Ey P.L., Prowse S.J., Jenkin C.R. Isolation of pure IgG1, IgG2a, and IgG2b immunoglobulins from mouse serum using protein A-sepharose. Immunochemistry 1978;15(7):429-36. PMID: 30693.

5. Голубцова Н.В., Бурова О.С., Барышников К.А. и др. Моноклональные антитела ICO-406 против антигена CD117. Российский онкологический журнал 2015;2:99-104.

6. Temponi M., Kageshita T., Perosa F. et al. Purification of murine IgG monoclonal antibodies by precipitation with caprylic acid: comparison with other methods of purification. Hybridoma 1989;8:85-95. DOI: 10.1089/hyb.1989.8.85. PMID: 2784406.

7. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature 1970;227(5259):680-5. PMID: 5432063.

8. Толчева Е.В., Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. и др. Анти-от5-иммуно-липосомы как транспортная система для направленной доставки лекарственных препаратов к от5+-клеткам. Российский биотерапевтический журнал 2005;4:38-43.

9. Murata M., Kawamura A.Jr. Effect of molar ratio of fluorescent dye to IgG on the detection of lymphocyte surface immunoglobulins by immunofluorescence. Microbiol Immunol. 1980;24(1):65-78. PMID: 6767174.

Russian Journal of Biotherapy. 2016; 15: 44-48

THE USE OF OLIGOSACCHARIDES OF IMMUNOGLOBULIN FOR MODIFICATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES

Grinevich A. S., Kraeva M. N., Burova O. S., Ivanov P. K.

https://doi.org/10.17650/1726-9784-2016-15-4-44-48

Abstract

Bakground. Monoclonal antibodies are reliable and convenient tool for the diagnosis of human pathologies. Most often they are used as conjugates with fluorescent or other labels. The classical approach of creating such conjugates reduces chemical reactions using monoclonal antibodies protein base. However, for a number of manufacturing monoclonal antibodies conjugate followed by embedding tags in the antigen binding site, which leads to reduction or complete loss of specific activity of the conjugate. The way out of this situation could be the synthesis of fluorescent conjugates, methods of carbohydrate chemistry through spatially distant from the active site of the antibody oligosaccharides. The purpose of the study - to show the fundamental possibility of chemical modification of the oligosaccharides monoclonal antibodies ICO series and get to their base fluorescent conjugates. Materials and methods. We used monoclonal antibodies panel ICO series of high purity. Oligosaccharides monoclonal antibodies oxidized to aldehyde groups, is reacted with a hydrazine derivative of biotin and streptavidin-conjugated flyuoristsiinom. The resulting complex was used for the direct reaction immunofluorescence. Results. All modified monoclonal antibodies retain binding specificity to target cells inherent to native antibodies. Conclusions. This may be an alternative method for conjugating a fluorescent label with monoclonal antibodies to protein synthesis methods which lead to loss of activity of the conjugate.

References

1. Buchowicz I., Zakrzewski K. Carbohydrate oxidation and antibody function in equine anti-diphtheria immunoglobulin T. Immunochemistry 1975;12:795-800. PMID: 173648.

3. Hermanson G.T. Bioconjugate techniques. Amsterdam: Elsevier Academic Press, 2013.

4. Ey P.L., Prowse S.J., Jenkin C.R. Isolation of pure IgG1, IgG2a, and IgG2b immunoglobulins from mouse serum using protein A-sepharose. Immunochemistry 1978;15(7):429-36. PMID: 30693.

5. Golubtsova N.V., Burova O.S., Baryshnikov K.A. i dr. Monoklonal'nye antitela ICO-406 protiv antigena CD117. Rossiiskii onkologicheskii zhurnal 2015;2:99-104.

7. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature 1970;227(5259):680-5. PMID: 5432063.

8. Tolcheva E.V., Baryshnikov A.Yu., Oborotova N.A. i dr. Anti-ot5-immuno-liposomy kak transportnaya sistema dlya napravlennoi dostavki lekarstvennykh preparatov k ot5+-kletkam. Rossiiskii bioterapevticheskii zhurnal 2005;4:38-43.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОЛИГОСАХАРИДОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ МОДИФИКАЦИИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

Аннотация

THE USE OF OLIGOSACCHARIDES OF IMMUNOGLOBULIN FOR MODIFICATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES

Abstract

События

EasyCookieInfo