Андрология и генитальная хирургия. 2019; 20: 40-47
Сравнительный анализ культурального и молекулярногенетического методов в исследовании микробиоты эякулята при мужской инфертильности
https://doi.org/10.17650/2070-9781-2019-20-2-40-47Аннотация
Цель исследования — сравнить результаты исследований эякулята с помощью стандартного культурального метода и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР РВ).
Материалы и методы. С 2016 по 2018 г. проведено проспективное исследование с участием 143 мужчин, обратившихся в урологическую клинику Ивановской государственной медицинской академии по поводу бесплодия и с целью прегравидарной подготовки. Выполнено исследование эякулята культуральным методом и методом ПЦР РВ. В 1-ю группу вошли 54 пациента с лейкоспер-мией и бактериоспермией; во 2-ю — 58 пациентов, у которых лейкоспермия отсутствовала, но выявлена бактериоспермия; контрольную группу составил 31 мужчина без лейкоспермии и бактериоспермии по результатам ПЦР РВ.
Результаты. Наиболее часто при проведении ПЦР РВ эякулята в 1-й и 2-й группах встречались Corynebacterium spp. (соответственно 51,9 и 60,3 %) и Enterobacteriaceae spp./Enterococcus spp. (51,9 и 62,1 %), но статистически значимых различий между группами не установлено. Спектр выявленных микроорганизмов по данным культурального исследования и ПЦР РВ совпадал почти во всех случаях, но у 22 (15,4 %) пациентов при проведении ПЦР РВ были выявлены Enterobacteriaceae/Enterococcus spp., которые не были обнаружены при культуральном исследовании. Этим мужчинам назначали препарат бовгиалуронидаза азокси-мер («Лонгидаза®») (2 раза в неделю в течение 1 мес) для противовоспалительной терапии и уменьшения выраженности лейкоспермии. При контрольных посевах эякулята после окончания терапии были выявлены те же микроорганизмы, что ранее обнаруживались по результатам ПЦР РВ.
Заключение. Наше исследование демонстрирует преимущество метода ПЦР РВ в сравнении со стандартным культуральным исследованием эякулята. ПЦР РВ может быть рекомендована как скрининговый метод. Для повышения точности выявления микроорганизмов целесообразно назначение препарата «Лонгидаза®», который способствует дренированию ацинусов предстательной железы.
Список литературы
1. Andrology: male reproductive health and dysfunction. Ed. by E. Nieschlag, H.M. Behre, Nieschlag S. 3rd edn. Berlin; Heidelberg: Springer-Verlag, 2010. 629 p.
2. Бесплодный брак. Современные подходы к диагностике и лечению. Под ред. Г.Т. Сухих, Т.А. Назаренко. 2-е изд., испр. и доп. М.: Гэотар-Медиа, 2010. 774 с.
3. Рациональная фармакотерапия в урологии: руководство для практикующих врачей. Под ред. Н.А. Лопаткина, Т.С. Перепановой. 2-е изд., испр. и доп. М.: Литтерра, 2006. 796 с.
4. Studies on mens health and fertility. Ed. by A. Agarwal, R.J. Aitken, J.G. Alvarez. Humana Press, 2012. Р. 671. DOI: 10.1007/978-1-61779-776-7.
5. Jungwirth J.A., Diemer T., Copa Z. et al. Male infertility. European Association of Urology Guidelines 2018. Available at: http://uroweb.org/guideline/male-infertility.
6. Урология. Российские клинические рекомендации. Под ред. Ю.Г. Аляева, П.В. Глыбочко, Д.Ю. Пушкаря. М.: Медфорум, 2018. 544 с.
7. Клинические рекомендации по андро-логической урологии. Под ред. П.А. Щеплева. М.: Медфорум, 2016. 120 с.
8. Nickel J.C. Chronic prostatitis: an infectious disease? Infect Urol 2000;13(2):31—8.
9. Лоран О.Б., Пушкарь Д.Ю., Сегал А.С., Юдовский С.О. Наше понимание проблемы хронического простатита. Фар-матека 2002;(10):69—75.
10. Xie H., Huang H.C., Yang Y.R. et al. [Expressions of bacterial 16S rRNA, IL-1beta, TNF-alpha and NGF in prostate tissues (In Chinese)]. Zhonghua Nan Ke Xue 2010;16(1):40-3.
11. Ricci S., De Giorgi S., Lazzeri E. et al. Impact of asymptomatic genital tract infections on in vitro fertilization (IVF) outcome. PLoS One 2018;13(11): e0207684. DOI: 10.1371/journal.pone.0207684.
12. Чалый М.Е., Ахвледиани Н.Д., Харчи-лава Р.Р. Мужское бесплодие. Урология 2018;(прил. 1):4—19.
13. Божедомов В.А. Хроничский простатит: новая парадигма лечения. Урология 2016;3(прил. 3):78—90.
14. Почерников Д.Г., Яковлева Л.В., Стрельников А.И. и др. Опыт применения лиофилизированного лизата бактерий E. coli OM-89 (Уро-Ваксом®) у мужчин при асимптомной бактерио-спермии. Урология 2015;(4):84—9.
15. Почерников Д.Г., Галкина И.С., Посто-войтенко Н.Т., Герасимов А.М. Сравнительный анализ биотопа эякулята и цервикального канала методом ПЦР-РВ с тестами «Андрофлор» и «Фемо-флор» в супружеских парах. Вестник Российского государственного медицинского университета 2017;(2):37—41.
16. Почерников Д.Г., Постовойтенко Н.Т., Стрельников А.И. Сравнительная оценка эффективности лечения хронического бессимптомного простатита (категория IV), обусловленного Enterococcus spp. Эффективная фармакотерапия 2017;34(4):6—12.
17. Почерников Д.Г., Постовойтенко Н.Т., Стрельников А.И., Почерникова М.Н. Сравнительная оценка микробиоценозов отделяемого цервикального канала и эякулята в супружеских парах. Анд-рология и генитальная хирургия 2018;19(2):12—20.
18. Nickel J.C., Stephens A., Landis J.R. Search for microorganisms in men with urologic chronic pelvic pain syndrome: a culture-independent analysis in the MAPP research network. J Urol 2015;194(1):127—35. DOI: 10.1016/j.juro.2015.01.037.
19. Липова Е.В., Чекмарев А.С., Болдырева М.Н. Новый метод диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний нижних отделов мочеполового тракта у мужчин (тест «Андрофлор®», «Андрофлор®Скрин»). М., 2017. 48 с.
20. Локшин К.А. Актуальные вопросы антибиотикотерапии простатитов. Урология 2014;(1):55—61.
21. Фаниев М.В., Шевченко Н.П., Кадыров З.А. Современные стратегии ведения инфертильных мужчин с хроническим бактериальным простатитом на этапе прегравидарной подготовки в протоколе вспомогательных репродуктивных технологий. Андрология и генитальная хирургия 2017;18(3): 44-53.
22. Степанова Т.В., Романова Ю.М., Алексеева Н.В. и др. Разработка средств борьбы с биопленками: изучение воздействия полисахаридных лиаз на матрикс биопленок, образуемых Pseudomonas aeruginosa и Burkholderia cenocepacia. Медицинский алфавит 2010;(2):47—51.
23. Tenke P., Koves B., Nagy K. et al. Update on biofilm infections in the urinary tract. World J Urol 2012;30(1):51—7. DOI: 10.1007/s00345-011-0689-9.
24. Межрегиональная ассоциация по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии. Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Клинические рекомендации. М., 2015. 162 с.
Andrology and Genital Surgery. 2019; 20: 40-47
Comparative analysis of cell culture and molecular genetic testing of semen microbiota in male infertility
https://doi.org/10.17650/2070-9781-2019-20-2-40-47Abstract
The study objective is to compare the results of semen analysis using the standard cell culture method and real time polymerase chain reaction (RT-PCR).
Materials and methods. Between 2016 and 2018, a prospective study including 143 males who applied to the Urology Clinic of the Ivanovo State Medical Academy due to infertility and for periconceptional preparation was performed. Semen was examined using cell culture method and RT-PCR. The group 1 included 54patients with leukospermia and bacteriospermia; the group 2 included 58patients without leukospermia but with bacteriospermia; the control group consisted of 31 males without leukospermia and bacteriospermia based on RT-PCR.
Results. Per RT-PCR, the most frequent microorganisms in the groups 1 and 2 were Corynebacterium spp. (51.9 and 60.3 %) and Enterobacteriaceae spp./Enterococcus spp. (51.9 and 62.1 %), but there weren’t any significant differences between the groups. The range of detected microorganisms per cell culture method and RT-PCR was the same in most cases, but in 22 (15.4 %) patients RT-PCR detected Enterobacteriaceae/Enterococcus spp., which weren’t observed in cell culture. These males were prescribed bovhyaluronidase azoximer (Longidase®) 2 times a week for 1 month for anti-inflammatory therapy and to decrease leukospermia. Post-therapy control semen cultures detected microorganisms that were previously detected by RT-PCR.
Conclusion. Our study demonstrates the advantages of RT-PCR compared to the standard cell culture semen analysis. RT-PCR can be recommended as a screening method. To increase the accuracy of microorganism detection, Longidase® is recommended because it promotes prostatic acini drainage.
References
1. Andrology: male reproductive health and dysfunction. Ed. by E. Nieschlag, H.M. Behre, Nieschlag S. 3rd edn. Berlin; Heidelberg: Springer-Verlag, 2010. 629 p.
2. Besplodnyi brak. Sovremennye podkhody k diagnostike i lecheniyu. Pod red. G.T. Sukhikh, T.A. Nazarenko. 2-e izd., ispr. i dop. M.: Geotar-Media, 2010. 774 s.
3. Ratsional'naya farmakoterapiya v urologii: rukovodstvo dlya praktikuyushchikh vrachei. Pod red. N.A. Lopatkina, T.S. Perepanovoi. 2-e izd., ispr. i dop. M.: Litterra, 2006. 796 s.
4. Studies on mens health and fertility. Ed. by A. Agarwal, R.J. Aitken, J.G. Alvarez. Humana Press, 2012. R. 671. DOI: 10.1007/978-1-61779-776-7.
5. Jungwirth J.A., Diemer T., Copa Z. et al. Male infertility. European Association of Urology Guidelines 2018. Available at: http://uroweb.org/guideline/male-infertility.
6. Urologiya. Rossiiskie klinicheskie rekomendatsii. Pod red. Yu.G. Alyaeva, P.V. Glybochko, D.Yu. Pushkarya. M.: Medforum, 2018. 544 s.
7. Klinicheskie rekomendatsii po andro-logicheskoi urologii. Pod red. P.A. Shchepleva. M.: Medforum, 2016. 120 s.
8. Nickel J.C. Chronic prostatitis: an infectious disease? Infect Urol 2000;13(2):31—8.
9. Loran O.B., Pushkar' D.Yu., Segal A.S., Yudovskii S.O. Nashe ponimanie problemy khronicheskogo prostatita. Far-mateka 2002;(10):69—75.
10. Xie H., Huang H.C., Yang Y.R. et al. [Expressions of bacterial 16S rRNA, IL-1beta, TNF-alpha and NGF in prostate tissues (In Chinese)]. Zhonghua Nan Ke Xue 2010;16(1):40-3.
11. Ricci S., De Giorgi S., Lazzeri E. et al. Impact of asymptomatic genital tract infections on in vitro fertilization (IVF) outcome. PLoS One 2018;13(11): e0207684. DOI: 10.1371/journal.pone.0207684.
12. Chalyi M.E., Akhvlediani N.D., Kharchi-lava R.R. Muzhskoe besplodie. Urologiya 2018;(pril. 1):4—19.
13. Bozhedomov V.A. Khronichskii prostatit: novaya paradigma lecheniya. Urologiya 2016;3(pril. 3):78—90.
14. Pochernikov D.G., Yakovleva L.V., Strel'nikov A.I. i dr. Opyt primeneniya liofilizirovannogo lizata bakterii E. coli OM-89 (Uro-Vaksom®) u muzhchin pri asimptomnoi bakterio-spermii. Urologiya 2015;(4):84—9.
15. Pochernikov D.G., Galkina I.S., Posto-voitenko N.T., Gerasimov A.M. Sravnitel'nyi analiz biotopa eyakulyata i tservikal'nogo kanala metodom PTsR-RV s testami «Androflor» i «Femo-flor» v supruzheskikh parakh. Vestnik Rossiiskogo gosudarstvennogo meditsinskogo universiteta 2017;(2):37—41.
16. Pochernikov D.G., Postovoitenko N.T., Strel'nikov A.I. Sravnitel'naya otsenka effektivnosti lecheniya khronicheskogo bessimptomnogo prostatita (kategoriya IV), obuslovlennogo Enterococcus spp. Effektivnaya farmakoterapiya 2017;34(4):6—12.
17. Pochernikov D.G., Postovoitenko N.T., Strel'nikov A.I., Pochernikova M.N. Sravnitel'naya otsenka mikrobiotsenozov otdelyaemogo tservikal'nogo kanala i eyakulyata v supruzheskikh parakh. And-rologiya i genital'naya khirurgiya 2018;19(2):12—20.
18. Nickel J.C., Stephens A., Landis J.R. Search for microorganisms in men with urologic chronic pelvic pain syndrome: a culture-independent analysis in the MAPP research network. J Urol 2015;194(1):127—35. DOI: 10.1016/j.juro.2015.01.037.
19. Lipova E.V., Chekmarev A.S., Boldyreva M.N. Novyi metod diagnostiki infektsionno-vospalitel'nykh zabolevanii nizhnikh otdelov mochepolovogo trakta u muzhchin (test «Androflor®», «Androflor®Skrin»). M., 2017. 48 s.
20. Lokshin K.A. Aktual'nye voprosy antibiotikoterapii prostatitov. Urologiya 2014;(1):55—61.
21. Faniev M.V., Shevchenko N.P., Kadyrov Z.A. Sovremennye strategii vedeniya infertil'nykh muzhchin s khronicheskim bakterial'nym prostatitom na etape pregravidarnoi podgotovki v protokole vspomogatel'nykh reproduktivnykh tekhnologii. Andrologiya i genital'naya khirurgiya 2017;18(3): 44-53.
22. Stepanova T.V., Romanova Yu.M., Alekseeva N.V. i dr. Razrabotka sredstv bor'by s bioplenkami: izuchenie vozdeistviya polisakharidnykh liaz na matriks bioplenok, obrazuemykh Pseudomonas aeruginosa i Burkholderia cenocepacia. Meditsinskii alfavit 2010;(2):47—51.
23. Tenke P., Koves B., Nagy K. et al. Update on biofilm infections in the urinary tract. World J Urol 2012;30(1):51—7. DOI: 10.1007/s00345-011-0689-9.
24. Mezhregional'naya assotsiatsiya po klinicheskoi mikrobiologii i antimikrobnoi khimioterapii. Opredelenie chuvstvitel'nosti mikroorganizmov k antimikrobnym preparatam. Klinicheskie rekomendatsii. M., 2015. 162 s.
